利用接枝NgR抗体的透明质酸水凝胶修复中枢神经系统损伤的实验研究

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利用接枝NgR抗体的透明质酸水凝胶修复中枢神经系统损伤的实验研究在成年哺乳动物神经系统中,已知周围神经(PNS)损伤后是可以再生的,中枢神经(CNS)损伤后再生则十分困难。近来研究发现CNS环境中存在的Nogo等抑制轴突生长的因子是阻碍再生的主要因素。为探索利用组织工程学技术辅助修复CNS损伤的可行性,我们制备了透明质酸(HA)水凝胶作为三维生物框架材料基质,在其表面接枝Nogo受体(NgR)的抗体(NgR-Ab),构建成抗体缓释体系,在此基础上,评价了这种接枝抗体的水凝胶在体外对神经细胞生长的影响,观察了将其植入脑损伤大鼠的皮层缺损区后对神经组织再生与修复的辅助作用效果,还观察了将其用于一侧皮质运动区局灶性脑缺血大鼠脑内移植后对行为学改善的影响。结果显示,制备的水凝胶-抗体缓释体系具有疏松多孔结构、95%的吸水率与90%的孔隙率;接枝NgR-Ab后在37℃下,pH7.4的缓冲液中抗体能够持续释放400小时。在体外与鸡胚背根神经节(DRG)细胞共培养时,接枝NgR-Ab的HA水凝胶支持DRG细胞的粘附生长,而未接枝NgR-Ab的HA水凝胶无此效应;神经轴突诱导实验显示,与未接枝NgR-Ab的HA水凝胶相比,接枝NgR-Ab的HA水凝胶和DRG共培养神经轴突生长的数量和距离显著提高(bothp<0.01)。接枝NgR-Ab的HA水凝胶在植入大鼠脑皮层的损伤缺损区后可以与周围组织良好整合;植入4周后,在Nissl染色下可见植入材料中有多量细胞浸润;DAB染色显示植入物中有大量新生血管;GFAP免疫组化染色可见植入材料周围有少量阳性细胞,但与胶质疤痕增生表现明显不同;NF免疫组化染色显示植入材料内出现阳性神经终末样结构;16周后透射电镜观察见植入区域内有各型胶质细胞及轴突出现。行为学实验显示,13周后右前肢的主动运动和协调功能有轻度改善。研究结果提示,接枝NgR-Ab的HA水凝胶可以缓慢释放NgR-Ab,在体外支持神经细胞及轴突的生长,植入脑内后促进损伤区组织细胞的迁移、血管发生以及轴突生长,并且对一侧脑缺血模型动物的行为学改善有积极的影响。
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