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背景:胃癌是源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,发病率居我国恶性肿瘤首位,近年来,大量研究已证实胃癌的发生、发展和预后是多基因改变的结果,因此研究胃癌相关基因及其蛋白改变不仅有助于理解胃癌的发病机制,而且也可发现在胃癌诊断和预后评估中有临床意义的分子标记物。尾型同源盒基因-2(CDX2)是人体中肠道特异性表达的核转录因子,对肠黏膜上皮细胞的发育及其形态和结构特征的维持具有重要作用。正常情况下CDX2表达于小肠及结肠上皮细胞,而在胃黏膜组织中无表达。近年来有研究结果显示,CDX2在慢性萎缩性胃炎(CAG)相关的肠化生、Barrett食管及部分胃癌中有表达,提示其在胃黏膜肠化生及胃癌发生中可能有重要作用。目的:构建人同源基因CDX2真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC-823,研究过表达CDX2基因对胃癌细胞的生物学行为的影响。方法:日本广岛大学细胞Dr. ShuhoSemba馈赠pcDNA4/TO/Myc-HisA-CDX2载体质粒,从pcDNA4/TO/Myc-HisA-CDX2载体质粒中扩增目的基因CDX2,克隆到pEGFP-C1中,得到pEGFP-C1-CDX2;脂质体介导法瞬时转染pEGFP-C1和pEGFP-C1-CDX2至人胃癌细胞BGC-823中,G418筛选出阳性克隆后扩大培养,RT-PCR和Western Blot技术检测各组胃癌细胞中CDX2基因mRNA和蛋白的表达情况,将挑选出的稳定株命名为BGC-823/CDX2细胞;流式细胞仪检测BGC-823细胞(未转染组)、BGC-823/EV细胞(空载体组)和BGC-823/CDX2(转染组)细胞的凋亡情况,MTT法观测各组细胞的增殖情况,细胞划痕试验检测各组细胞迁移能力,透射电镜观察转染细胞形态学的改变。结果:(1)成功构建真核表达载体pEGFP-C1-CDX2;(2)成功筛选出稳定过表达CDX2基因的BGC-823胃癌细胞,即BGC-823/CDX2细胞;(3)与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2细胞中CDX2基因mRNA和蛋白的表达明显上调;(4)与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞在转染72小时后出现了明显的生长抑制;(5)划痕实验显示:与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞的迁移能力降低;(6)与BGC-823细胞和BGC-823/EV细胞比较,BGC-823/CDX2组细胞的凋亡率并无明显增加(P>0.05)。(7)电镜结果显示,与BGC-823组细胞相比,BGC-823/CDX2组细胞死亡较多,部分细胞可见核膜皱缩,染色质边集等早期凋亡现象。结论:成功构建了稳定过表达CDX2基因的胃癌细胞株,而且CDX2过表达明显抑制胃癌细胞增殖、降低迁移能力,提示CDX2在胃癌中可能发挥抑癌基因的作用。