肉鸡肺动脉高压综合征(PHS),又称肉鸡腹水综合征(AS),是发生于快速生长的肉鸡的一种营养代谢性疾病。PHS不但造成肉鸡发育不良、屠宰体重不达标,而且引起肉鸡死亡率、淘汰率大幅度上升,每年造成我国养鸡业巨大经济损失。虽然国内外对PHS进行了大量的研究,但其发生机制尚不完全清楚。本研究采用翅静脉注射纤维素微粒的方法诱发肉鸡PHS,从肺小动脉平滑肌细胞(PASMC)内5-羟色胺(5-HT)的含量和5-羟色胺转载体(5-HTT)在肺组织的表达量与肺血管平滑肌细胞增殖、凋亡的关系入手,进一步研究PHS的发生机制,为探索新的防治肉鸡PHS的方法奠定基础。　　 试验1 肉鸡PHS发病模型的建立　　 采用翅静脉注射纤维素微粒的办法诱发PHS,并对比发病组肉鸡与正常肉鸡的红细胞压积(PCV)、血红蛋白(HB)含量、血清蛋白含量、右心室重与全心室重量比值(RV/TV)及肺组织结构变化。另外比较2组鸡的体重、周增重和饲料转化率,评判静脉注射纤维素微粒是否影响到肉鸡生产性能。试验结果显示,静脉注射纤维素微粒明显提高肉鸡PHS的发病率,而且该诱病方法对肉鸡的上市体重、饲料转化率未产生显著影响。发病组肉鸡PCV、HB和RV/TV值升高,血清蛋白含量降低,符合肉鸡PHS的特点。另外,纤维素微粒阻塞于肺小血管内,引起炎性细胞和血小板的聚集。表明翅静脉注射纤维素微粒的办法成功诱发了PHS。　　 试验2 5-HT对肉鸡肺动脉压的影响　　 通过对肉鸡静脉滴注不同浓度的5-HT溶液,观察5-HT对肉鸡肺动脉压的影响。结果表明,高于0.025 mg/mL,浓度的5-HT溶液可引起肉鸡肺动脉压急速升高,乃至死亡;低浓度(0.0075mg/mL)的5-HT溶液滴注可引起肺动脉压快速升高,30s后达到峰值,之后稍有降低,但仍高于静脉滴注5-HT前的水平。结果证明5-HT可以引起肉鸡肺动脉压的升高。　　 试验3 5-HTT抑制剂对PHS肉鸡肺血管重构(PVR)的影响　　 科宝肉鸡按常规方法育雏,试验共分为6组,B1、B2、B3组为发病组,50只/组。20日龄通过翅静脉注射0.3毫升/只的CM-32离子交换纤维素悬液进行诱病:A1、A2、A3组为对照组,30只/组。通过翅静脉注射0.3毫升/只的生理盐水;A2、B2组从18日龄起,通过灌胃器口服氟西汀(溶于蒸馏水中),剂量为10mg/kg/d,每天1次,连续16d;A3、B3组通过灌胃器口服西酞普兰,剂量为10mg/kg/d,每天1次,连续16d;空白对照A1组和发病对照B1组,灌服同体积蒸馏水。采用计算机病理图像分析软件测定肺小动脉相对中膜面积(WA/TA)、平均中膜厚度(mMTPA)和肺厚壁末梢血管百分比(TWPV％)。结果显示,从28同龄(静注纤维素微粒后第8天)起,发病组肉鸡WA/TA值、mMTPA值和TWPV％均显著高于对照组(P＜0.05),而氟西汀组和西酞普兰组其WA/TA值、mMTPA值和TWPV％均显著低于灌服蒸馏水组(P＜0.05)。结果表明,发病组肉鸡发生了肺小动脉中膜增厚和肺小动脉肌性化的现象,提示PVR的发生;而5-HTT抑制剂能减缓PVR的发生。　　 试验4 5-HTT抑制剂对PHS肉鸡肺小动脉平滑肌细胞增殖的影响　　 实验分组、处理同于试验3。采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色法和核仁组织区嗜银蛋白(AgNOR)染色法,观察肺小动脉中膜平滑肌细胞的增殖情况。结果表明,静脉注射纤维素微粒可显著增加肉鸡肺小动脉中膜平滑肌PCNA阳性细胞的数量和AgNOR阳性细胞的比例,5-HTT抑制剂的使用在一定程度上可减少肉鸡肺小动脉中膜平滑肌PCNA阳性细胞的数量和AgNOR阳性细胞的比例,揭示静脉注射纤维素微粒诱发的PHS肉鸡PASMC过度增殖,从而导致PVR的发生,其作用方式可能是通过5-HTT介导5-HT内化的作用增强来实现。而应用5-HTT抑制剂能够减少5-HT内化,从而抑制PASMC过度增殖。　　 试验5 5-HTT抑制剂对肺小动脉平滑肌中5-HT含量及肺组织中5-HTT表达量的影响　　 实验分组、处理同于试验3。肺组织切片经5-HT免疫组织化学染色后,采用病理图像分析软件检测直径在30～60μm的肺小动脉中膜的光密度(OD)值,以OD值代表肺小动脉中膜内5-HT的含量;半定量反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织中5-HTT的表达量。结果显示,静脉注射纤维素微粒后,肉鸡肺小动脉管壁内的5-HT含量显著增加,肺组织中5-HTT表达上调,5-HTT抑制剂在一定程度上降低了肺小动脉管壁的5-HT含量,表明静脉注射纤维素微粒诱发肉鸡PHS的发病过程中,被肺小动脉平滑肌内化的5-HT的量增加,而5-HTT抑制剂能减轻这一现象的发生,表明5-HT和5-HTT参与肉鸡PHS的病理发生过程。试验6 5-HT对体外培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响　　 采用胶原酶消化法培养原代肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC),通过形态学和抗α肌动蛋白抗体免疫组织化学法对所培养的细胞进行鉴定,同时检测不同浓度的5-HT对肉鸡PASMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测PASMC周期和凋亡情况。结果发现,10-4～10-7mol/L的5-HT能剂量依赖性地促进肉鸡PASMC的增殖,机理可能是5-HT可加速细胞从G1期向S期过渡,同时5-HT也可促进PASMC凋亡,但5-HT可能更大幅度地促进了PASMC的分裂和增殖,因此在总体上表现为5-HT促进PASMC的增殖。　　 试验7 5-HTT抑制剂对体外培养的肉鸡PASMC的毒性作用及其对5-HT作用下的PASMC增殖与凋亡的影响　　 通过MTT比色法研究不同浓度的氟西汀和西酞普兰对肉鸡PASMC的毒性作用。结果显示,10-5mol/L氟西汀和10-4mol/L西酞普兰可明显抑制PASMC增殖,氟西汀对肉鸡PASMC半数毒性浓度为84.21μmol/L,95％可信区间为53.6～135.41.μmol/L;而西酞普兰对肉鸡PASMC半数毒性浓度为487.1μmol/L,95％可信区间为300.1～845.1μmol/L。　　 采用MTT比色法、流式细胞术及Hoechst33258荧光染色法研究氟西汀和西酞普兰对5-HT作用下的PASMC增殖与凋亡的影响,发现氟西汀和西酞普兰能够抑制5-HT促进PASMC增殖的作用;5×10-6mol/L氟西汀和5×10-5mol/L西酞普兰能明显促进PASMC的凋亡,但氟西汀或西酞普兰和5-HT共同处理,PASMC凋亡明显少于氟西汀或西酞普兰单一处理,说明在对PASMC促凋亡作用方面,5-HT和5-HTT抑制剂表现为拮抗作用。　　 以上结果表明:　　 1.5-HT在静脉注射纤维素微粒诱发的肉鸡PHS中起重要的作用。5-HT收缩肺动脉血管,引起肺组织缺氧,缺氧促使肺组织中5-HTT表达量增加,被5-HTT内化的5-HT增多,从而促进肺血管平滑肌细胞增殖,导致PVR的发生,诱发肉鸡PHS。　　 2.5-HT通过5-HTT路径参与肉鸡PHS的发生。静脉注射纤维素微粒诱发的PHS肉鸡肺组织中5-HTT明显增多,肺小动脉中膜层平滑肌细胞胞质中5-HT增多,平滑肌细胞增殖明显,肺血管重构发生,而使用外源性5-HTT抑制剂氟西汀和西酞普兰能减少肺小动脉中膜层平滑肌细胞胞质中5-HT的量,抑制平滑肌细胞增殖,减弱肺血管重构的发生。在体外试验也证实氟西汀和西酞普兰可以抑制5-HT的促PAMSC增殖作用。