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目的:观察盐皮质激素受体拮抗剂依普利酮（Eplerenone）能否有效改善自发性高血压大鼠（Spontaneously hypertensive rat,SHR）认知功能损伤,并探讨依普利酮发挥神经保护作用的自噬机制。方法:1.动物分组及给药将12周龄雄性SHR大鼠随机分为3组:SHR-Veh组、SHR-EPL30组（依普利酮30mg/Kg/d）、SHR-EPL100组（依普利酮100mg/Kg/d）,12周龄雄性WKY大鼠作为SHR的正常血压对照组。每组大鼠12只。每天下午5点通过口服灌胃给予2ml依普利酮悬浊液或等体积纯水,连续给药8周。2.大鼠血压测量及血钾水平检测在给药前、给药后第1周、第3周、第6周和第8周,使用无创鼠尾血压计测量各组大鼠清醒、安静状态下的鼠尾血压。每只大鼠重复测量2次取平均值,记为当天血压。在给药前、给药后第4周采用剪尾采血法留取各组大鼠血液样本。第8周处死老鼠时采用腹主动脉采血法留取各组大鼠血液样本,分离血清,使用K+生化试剂盒检测血钾水平,根据标准曲线计算每只大鼠血钾水平。3.行为学实验自发交替Y迷宫实验:将大鼠置于Y迷宫中心区域,并使其自由探索迷宫,记录8 min内各组大鼠的进臂总次数及进臂顺序,计算自发交替正确率。Morris水迷宫实验:包括定位航行实验、空间探索实验和可视平台实验。第1-5天为定位航行实验,记录各组大鼠寻找水下平台的逃避潜伏期,和第5天的游泳轨迹;第6天进行空间探索实验,记录大鼠在目标象限的游泳时间和游泳轨迹,并计算其在目标象限的游泳时间百分比;第7天进行可视平台实验,记录大鼠到达可视平台的时间。此外记录大鼠在连续7天实验中的游泳速度。4.形态学实验利用HE染色观察大鼠海马神经元形态变化。每组随机选取5只大鼠,麻醉后取脑,4%多聚甲醛固定,梯度酒精脱水,石蜡包埋制作蜡块,石蜡切片机切厚3.5μm的海马区脑片,65℃烘烤2h防止脱片。常规脱蜡、复水。苏木精染色3分钟,自来水漂洗,PBS返蓝30秒,95%乙醇脱水30秒,伊红染色1分钟,自来水洗涤,然后梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。利用光学显微镜观察海马CA1区、CA3区、DG区神经元形态变化。5.Western Blot实验利用Western Blot定量大鼠海马盐皮质激素受体、突触小体蛋白Synaptophysin、突触后致密蛋白PSD95、自噬蛋白Beclin-1、LC3B和P62表达水平。每组随机选取7只大鼠,麻醉后取脑,冰上分离海马组织。常规提取海马组织蛋白并测定蛋白浓度,上样、电泳、转膜,5%BSA-TBST封闭,一抗4℃孵育过夜,二抗室温孵育,ECL法曝光显色,使用Imag J 2.0软件读取目的条带灰度值,以目的蛋白/GAPDH的比值反映目的蛋白表达水平。结果:1.依普利酮能够降低自发性高血压大鼠血压,但同时升高血钾水平。实验前,SHR-Veh组、SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠鼠尾收缩压均高于WKY组（P＜0.05）。实验期间WKY组大鼠血压无明显变化,SHR-Veh组大鼠血压略微升高,SHR-EPL30组大鼠血压略微下降,SHR-EPL100组大鼠血压下降明显。给药第6周,SHR-EPL30组大鼠鼠尾收缩压变化无统计学意义;SHR-EPL100组大鼠血压降低至177.92±2.38 mm Hg。给药第8周,SHR-EPL100组大鼠血压降低至169.25±2.28,较给药前自身血压和SHR-Veh组血压显著下降（P＜0.05）,但仍高于WKY组。实验前,WKY组、SHR-Veh组、SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠血钾浓度的组间比较无明显差异（P＞0.05）。给药期间,SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠血钾水平逐渐升高。给药第8周,SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠血钾浓度较给药前自身血钾水平、vehicle组和WKY组升高但无统计学意义（P＞0.05）。2.依普利酮改善自发性高血压大鼠认知行为障碍。在Y迷宫自发交替实验中,四组大鼠的进臂总次数无明显差异（P＞0.05）,SHR-Veh组大鼠的自发交替正确率明显低于WKY组（P＜0.001）、SHR-EPL30组（P＜0.001）和SHR-EPL100组（P＜0.001）。SHR-EPL30组、SHR-EPL100组和WKY组大鼠的自发交替正确率无明显差异（P＞0.05）。在Morris水迷宫定位航行实验的第3-5天,SHR-Veh组大鼠寻找水下平台的逃避潜伏期相较于WKY组大鼠明显延长（day3:P=0.008;day4:P=0.001;day5:P＜0.001）。SHR-EPL30组、SHR-EPL100组大鼠寻找水下平台的逃避潜伏期相较于SHR-Veh组大鼠明显缩短（SHR-EPL30 vs.SHR-Veh:day3:P=0.009,day4:P=0.004,day5:P＜0.001;SHR-EPL100 vs.SHR-Veh:day3:P=0.044,day4:P=0.002,day5:P＜0.001）。在第6天的空间探索实验中,与WKY组相比,SHR-Veh组在目标象限中的游泳时间百分比显著缩短（P=0.001）,穿台次数也明显减少（P＜0.001）;与SHR-Veh组相比,SHR-EPL30组、SHR-EPL100组大鼠在目标象限中的游泳时间百分比显著增加（SHR-EPL30组:P=0.010,SHR-EPL100组:P=0.015）,穿越平台次数也更多（SHR-EPL30组:P＜0.001,SHR-EPL100组:P=0.018）。四组大鼠在第7天可视平台实验中到达平台的游泳时间以及连续7天实验中的游泳速度均无统计学差异（P＞0.05）。3.依普利酮减轻自发性高血压大鼠海马神经元损伤,增加突触蛋白表达。光镜下,与WKY组相比,SHR-Veh组大鼠海马CA1区和CA3区损伤最为明显,表现为神经元数量减少,排列紊乱分散,出现胞浆空泡、核固缩和核溶解。SHR-EPL30组、SHR-EPL100组大鼠海马CA1和CA3区病变轻微,海马神经元细胞结构清晰,核与细胞质对比明显胞质丰富,胞浆空泡少;海马神经元排列有序,分布规则。SHR-Veh组海马DG区的病理改变相对不明显,但可见神经元数量减少。四组大鼠海马Synaptophysin表达水平没有明显差异（P=0.075）。与WKY组相比,SHR-Veh组大鼠突触后蛋白PSD95表达水平也显著降低（P=0.006）。SHR-EPL30组、SHR-EPL100组大鼠PSD95表达水平相较SHR-Veh组均增加（SHR-EPL30组:P=0.011,SHR-EPL30组:P=0.021）。4.依普利酮下调自发性高血压大鼠海马盐皮质激素受体表达,促进自发性高血压大鼠海马神经元自噬。与WKY组相比,SHR-Veh组大鼠海马区盐皮质激素受体表达水平显著增加（P＜0.001）。给予100mg/Kg/d依普利酮的SHR-EPL100组大鼠海马区盐皮质激素受体表达水平显著下降（P=0.028）。SHR-EPL30组大鼠海马区盐皮质激素受体表达水平略有下降。SHR-Veh组大鼠与WKY组大鼠相比,海马神经元自噬蛋白Beclin-1表达水平下降（P＜0.05）,P62蛋白表达升高（P＜0.05）。依普利酮增加SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠海马区自噬蛋白Beclin-1表达水平（P＜0.001）。LC3B-II/LC3B-I比值在SHR-EPL30组和SHR-EPL100组大鼠中均升高,反映出自噬激活,与SHR-Veh组相比,均有统计学差异（P＜0.001）。相应地,海马区P62蛋白的表达水平在SHR-EPL30组、SHR-EPL100组大鼠中均显著降低（P＜0.05）。结论:依普利酮能够有效改善自发性高血压大鼠的认知功能损害,减轻海马神经元损伤并增加突触蛋白表达。依普利酮的神经保护作用与促进海马神经元自噬密切相关。小剂量给予依普利酮可表现出较好的神经保护效应,且独立于降压作用。