根据GenBank上的禽呼肠病毒（ARV）S1基因序列，设计并合成了一对跨越P10和P17非结构蛋白基因的特异性引物，对13个ARV毒株进行RT-PCR扩增、克隆及序列测定。结果显示，13个ARV毒株的P10蛋白基因ORF全长均为297bp，编码98个氨基酸；P17蛋白基因ORF全长为441bp，编码146个氨基酸。这13个ARV毒株P10、P17蛋白基因核苷酸同源性分别在96.6％～100％和98.2％～100％之间，推导的氨基酸同源性分别在91.9％～99.0％和95.2％～99.3％之间。将这13个ARV毒株与GenBank上其他正呼肠病毒毒株，包括番鸭株（DRV）和飞狐上分离的内尔森海湾病毒（NelsonBayvirus，NBV）及两个澳洲分离株（ARM21和SOM24）进行同源性比较和遗传进化树分析，结果表明，呼肠病毒有地域和种类的差别。对ARV S1133株的P17非结构蛋白基因完整ORF进行RT-PCR扩增、与PGEX-4T-I原核表达载体连接，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，经0.2mmol／L的异丙基硫代-β-D-半乳糖（IPTG）诱导表达，SDS-PAGE电泳分析表明，表达的融合蛋白分子量为42.4kD，占全菌蛋白的34％。Western-blotting结果表明：原核表达的P17重组蛋白具有抗原性，能与活病毒感染的ARV阳性血清反应。另外，诱导表达了ARV的两个结构蛋白δ₃和δ₂以及两个非结构蛋白δNS和P17，分别用不同浓度的尿素和Triton X-100对这四个蛋白进行包涵体纯化，各蛋白的终浓度分别为：38mg／mL、48mg／mL、28mg／mL、46mg／mL。经BandScan4.3生物图象分析软件分析各蛋白的纯度分别是：68.6％、75.7％、84.0％和85.0％。达到较高的浓度和纯度，说明本试验探索的纯化方法能有效的纯化这些重组蛋白。最后，将纯化的δ₃、δ₂和δNS、P17蛋白分别作为包被用抗原进行间接酶联免疫吸附试验（ELISA），确定其最佳包被浓度分别为9.5μg／mL、12.0μg／mL和9.3μg／mL、11.5μg／mL；一抗稀释度均为1∶200；HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1∶5000，四种重组蛋白均不与NDV、AI和IBDV阳性血清发生交叉反应，具有较好的特异性。本研究初步建立了能检测ARV抗体的δ₃-ELISA、δ₂-ELISA方法，以及δ₃、δ₂两个蛋白同时包被的δ₃-δ₂ELISA方法。用这三种方法对ARV活病毒感染和灭活疫苗免疫鸡的血清进行检测，表明δ₃-δ₂-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。用相同的方法建立了能鉴别ARV灭活疫苗免疫和活病毒感染的δNS-ELISA和P17-ELISA方法，以及δNS、P17两个蛋白同时包被的δNS-P17-ELISA方法，并对这三种方法进行敏感性比较及统计学分析，结果表明两个非结构蛋白同时包被的ELISA方法比单个抗原包被的方法能更好的区分ARV灭活疫苗免疫与活病毒感染。