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磺胺二甲嘧啶(Sulfadimidine,SM2)是人工合成的一种抗菌磺胺类药,联合抗菌增效剂使用抗菌效果明显。由于其成本较低,故在养殖生产上不仅常做为药物添加剂使用,而且在治疗疾病时常加大剂量使用,导致磺胺二甲嘧啶在动物食品中残留,人食用残留有该药物的食品,易导致急性过敏和食物中毒。我国农业部235号公告规定规定磺胺二甲嘧啶在动物食品中最高残留量为100 μg/kg,针对这样的情况有必要开发一种快速、灵敏、检测成本低的检测方法。化学发光做为一种新的检测技术,具有检测灵敏、快速和结果受外界因素干扰小等特点,在检测领域展现出强大的优势。本研究以人工合成的磺胺二甲嘧啶抗原(SM2-BSA)对Balb/c小鼠进行免疫,经5次免疫后,用间接ELISA方法测定免疫小鼠血清效价,结果均达到1:4000,其中以100 μg/只免疫剂量进行免疫的5号小鼠血清效价最高,达到1:8000。以间接竞争ELISA方法测定该血清的血清半抑制浓度(IC50)在10~100 μg/L之间,故最后决定对5号小鼠进行细胞融合。细胞融合采用聚乙二醇4000作为融合剂,利用细胞融合技术将5号小鼠免疫脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,融合率为71.4%,经过3次克隆筛选后得到分泌抗SM2阳性杂交瘤细胞株2株,对其中一株进行扩大培养,命名为1E7,对杂交瘤细胞培养上清进行抗体亚类鉴定及效价测定,抗体亚类为IgG2b,效价为1:512。采用体内诱生法制备腹水,一周后采集腹水进行纯化,并检测纯化后抗体的效价、亲和力、灵敏度和特异性。结果纯化后抗体的亲和常数为0.12×107L/mol,抗体与磺胺脒、磺胺嘧啶、磺胺五甲嘧啶、青霉素、氧氟沙星、氯霉素和己烯雌酚的交叉反应率低于0.01%。利用纯化后的抗体建立检测磺胺二甲嘧啶化学发光酶免疫分析方法,对包被条件、包被时间、封闭材料、封闭时间、一抗稀释倍数、一抗竞争反应时间、二抗稀释倍数和二抗反应时间进行优化,最后采用优化后的条件绘制磺胺二甲嘧啶回归方程,方程为:y=-22.13x+63.338,R2=0.9904,IC50为4.006 μg/L,该曲线在0.1～1000 μg/L之间呈现良好的线性关系,方法的检出限为0.17 μg/L,方法回收率为94.42~102.73%。将本方法与国家标准方法及市售试剂盒进行比较,可见本方法在检出限、灵敏度、检测范围和回收率方面明显优于另外两种方法,选取其中的36份样品,同时使用市售ELISA试剂盒进行比对实验,比对结果表明两种方法之间结果符合率为100%,对检测结果进行t检验,结果P=0.684>0.05,表明两种方法检测结果差异不显著。使用本方法对采集的141份组织样品进行检测,样品合格率为91.4%。本研究利用细胞融合技术成功筛选出两株分泌抗磺胺二甲嘧啶的杂交瘤细胞株,并利用体内诱导的方法制备其中一株杂交瘤细胞的腹水。使用亲和层析的方法对腹水进行纯化,利用该抗体建立检测磺胺二甲嘧啶化学发光酶免疫方法,方法在检出限、检测范围和回收率方面明显优于国家标准和市售试剂盒,满足目前国家对动物食品中磺胺二甲嘧啶残留检测的要求,为今后试剂盒的开发打下基础。