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胶质瘤是神经外科中最富有挑战性的肿瘤之一,其发病率约占颅内肿瘤总数40%左右。目前治疗方法主要采用综合疗法,但由于肿瘤呈浸润生长,手术很难判定肿瘤边界,放疗对正常组织损伤较大,一些经典胶质瘤化疗药物由于血脑屏障存在及胶质瘤对这些药物存在耐药性,治疗效果也不十分明显。因此,寻求有效的化疗药物提高胶质瘤患者的生存率就成为目前一个重要的研究目标,对以组蛋白乙酰化酶为靶点的化疗药物的研究就是一个重要方向。正常细胞的分化以及代谢行为的调节依赖组蛋白乙酰基转移酶和组蛋白去乙酰化酶之间的平衡。一旦这种平衡关系被打破,细胞或组织就容易发生癌变,神经胶质瘤也不例外,组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过阻碍细胞周期、诱导细胞分化和凋亡以及抑制肿瘤血管生成从而抑制肿瘤的生长和增殖,目前在胶质瘤中的机制还不清楚。本课题通过体外试验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响,同时检测增殖和凋亡相关基因表达的变化,初步探讨其在治疗神经胶质瘤的作用及其机制。实验目的:通过体外培养神经胶质瘤U251细胞,观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂帕比司他(LBH589)对细胞生长和增殖的影响及其作用机制,为临床治疗神经胶质瘤提供一定的理论依据。实验方法:体外培养人胶质瘤U251细胞,选择处于对数生长期细胞进行实验,实验分组为对照组(Control)、LBH5890.5μmol.L-1组(0.5μmol.L-1)、LBH5891μmol.L-1组(1μmol.L-1)和LBH5892μmol.L-1组(2μmol.L-1)。MTT检测LBH589对U251细胞增殖率的影响;Hoechst33342检测LBH589对U251细胞凋亡率的影响;Western blot检测各组U251细胞中凋亡相关蛋白caspase-3及线粒体凋亡相关分子Bax、Bcl-2的蛋白表达水平;RT-PCR检测凋亡相关蛋白caspase-3mRNA及线粒体凋亡相关分子Bcl-2和BaxmRNA水平。实验结果:1、MTT结果显示,与Control组相比,给药浓度达到10μmol的时段,U251细胞增值率明显降低。2、Western blotting电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3及线粒体凋亡相关分子Bax和Bcl-2的蛋白表达水平,与Control组相比,LBH589组给药浓度越大,Bax/Bcl-2水平明显升高(P<0.05),caspase-3的表达水平增高,提示线粒体凋亡途径参与这个过程。3、Hoechst33342检测显示,LBH589对U251细胞凋亡率的影响,与Control组相比,明显看到在给药浓度达到2μmol时,细胞凋亡明显增多。4、RT-PCR结果显示,与Control组相比,LBH5890.5μmol.L-1组、LBH5891μmol.L-1组及LBH5892μmol.L-1组Bax/Bcl-2的mRNA水平明显升高,caspase-3的mRNA水平明显升高。实验结论:1、组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589能够抑制胶质瘤细胞U251的生长和增殖。2、组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589能通过线粒体途径诱导胶质瘤细胞U251发生凋亡。