ADP-核糖基化因子1(ARF1)对大肠癌细胞株体外粘附性影响的研究

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背景与目的:肿瘤细胞粘附其他肿瘤细胞、宿主细胞或细胞外基质成分的能力影响其侵袭和转移。粘附在侵袭过程中起双重作用,一方面面肿瘤细胞必须先从其原发灶的粘附部位脱离,故粘附可以抑制侵袭;另一方面,肿瘤细胞又需要借助粘附才能移动,肿瘤细胞从连续的粘附和去粘附中获得运动的牵引力。如果粘附太牢,它们就不能脱离和移动了,所以侵袭和转移的过程是粘附和去粘附的交替过程。细胞粘附分为两大类:①细胞-细胞粘附:②细胞-基质粘附。前者根据细胞类型分同质粘附和异质粘附,同质粘附是指同种细胞间粘附,后者是指两种以上细胞间的粘附。肿瘤的转移、侵袭能力越强,则同质黏附力越弱,细胞-基质粘附力越强。为了寻求结肠癌细胞的粘附性规律,进一步揭示结肠癌细胞转移和侵袭的分子生物学机制,本研究选取三种病理组织来源不同的结肠癌细胞株LoVo、SW480、LST-R1(Laterally Spreading Tumor-Rectum 1)进行研究。LoVo来自左侧锁骨上淋巴结结肠癌的转移灶,病理分期属Dukes′C期;SW480则来自结肠癌原发部位,病理分期属Dukes′B;LST-R1系我所建株的来源于直肠的侧向发育型肿瘤(Laterally Spreading Tumor,LST)的结肠癌细胞株,病理分期为Dukes′A。LST为直径10mm以上的呈侧向扩展而非垂直生长的一类表浅型肿瘤病变。 材料与方法:应用全人类表达谱基因芯片筛选上述三株结肠癌细胞株差异表达的基因。从中选取差异比较显著的、和细胞粘附密切相关的基因,应用半定量逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白免疫印迹从mRNA和蛋白表达两水平验证差异表达。并应用免疫细胞化学进行目的蛋白的细胞内定位检测。最后,本研究,针对目的基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)和目的基因的真核转染改变它的表达量,来进一步观察该蛋白对细胞同质粘附和异质黏附的影响。 结果:通过人类表达谱基因芯片高通量和平行筛选获得LST-R1相对于另外两株结肠癌细胞株表达差异大于2倍以上的基因97个,其中58条表达上调,39个下调表达。差异程度
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