黄胫小车蝗成虫和若虫的miRNA与转录组的研究

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黄胫小车蝗Oedaleus infernalis Sauss,隶属于直翅目(Orthoptera),斑翅蝗科(Oedipodidae),小车蝗属(Oedaleus Fieber),广泛分布于全国各地。目前大部分有关直翅目昆虫的研究多集中于外部形态分析、种群遗传多样性、线粒体基因组等方面,有关于黄胫小车蝗的miRNA和转录组的的研究还是空白。本次研究选取黄胫小车蝗的雄性成虫、雌性成虫和若虫三个样本作为实验材料,分别对这三种样品建立小RNA和转录组测序文库,利用Illumina HiSeqTM 2000测序平台,对黄胫小车蝗的雄性成虫、雌性成虫和若虫进行了niRNA和转录组进行深度测序、功能注释、差异表达基因分析、GO功能分析和KEGG代谢途径分析,对已知miRNA进行鉴定,预测新的miRNA。主要得到如下结果:(1)黄胫小车蝗雄虫测序文库共获得947个miRNA,雌性获得873个,若虫文库获得904个,分别对应3,549,697、32,61,224和3,316,811条序列拷贝数。(2)利用miRDeep软件对三个样品进行新miRNA的预测,得到雄性成虫新miRNA30个、雌性成虫43个、若虫32个。(3)对三个样品进行miRNA差异表达分析,得到雄性成虫和雌性成虫显著差异的miRNA 112个、新miRNA50个,成虫和若虫显著差异的已知miRNA 499个、新miRNA44个。对雄性和雌性的差异表达miRNA进行靶基因预测,得到差异显著的miRNA403个;预测成虫和若虫的差异表达miRNA的靶基因,得到516个靶基因。(4)黄胫小车蝗雄性、雌性成虫和若虫三个样本的转录组测序分别得到54,971,450、52,666,682、53,132,988条纯净序列。利用合并拼接序列策略进行组装,分别得到雄性成虫52,743个Unigene、雌性成虫57,437个Unigene和若虫57,608个Unigene,三个转录组合并后得到黄胫小车蝗51,608个Unigene,序列长度为57,606,410 nt。(5)对得到的51,608个Unigene进行基因功能注释后,共注释了25,061个Unigene,占总数的43.50%,其中注释到Nr数据库的有22,650个,Nt数据库的有12,789个,Swiss-Prot数据库的有18,701个,COG数据库有9,594个。得到GO功能注释信息的有10,839个,注释到KEGG代谢通路中的有16,724个。这些数据为研究黄胫小车蝗的生物学特征和基因表达等提供了重要数据。(6)由三个样品间的基因的表达分析和KEGG代谢通路通分析可以看出,雄性性成虫在细胞膜成分、酶调节等过程中表达的特异性基因比较多。雌性成虫由于繁殖的需要,在新陈代谢、细胞组分中表达的基因较多,而若虫在生长发育过程中表达基因更多。这些基因的生物学功能和主要参与的生化代谢途径和信号传导途径,共有16,724个Unigene参与了258条代谢通路中,这些基因的注释信息为研究黄胫小车蝗的生殖发育、生长代谢、信息传导、神经传递等适应调控机制提供了重要信息。
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