【摘 要】
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目的:研究吡格列酮对压力诱导髓核干细胞凋亡的保护作用,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:从人椎间盘中分离提取髓核干细胞,通过流式细胞术检测免疫表型,进一步检测其三系分化能力。用CCK-8试剂检测髓核干细胞的活性,通过LDH试剂盒和活死细胞染色研究吡格列酮对压力诱导的髓核干细胞毒性的影响。鬼笔环肽检测髓核干细胞细胞骨架情况。通过Annexin V/PI凋亡试剂盒、TUNEL染色评估吡格列酮对压力诱
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目的:研究吡格列酮对压力诱导髓核干细胞凋亡的保护作用,并进一步探讨其潜在的分子机制。方法:从人椎间盘中分离提取髓核干细胞,通过流式细胞术检测免疫表型,进一步检测其三系分化能力。用CCK-8试剂检测髓核干细胞的活性,通过LDH试剂盒和活死细胞染色研究吡格列酮对压力诱导的髓核干细胞毒性的影响。鬼笔环肽检测髓核干细胞细胞骨架情况。通过Annexin V/PI凋亡试剂盒、TUNEL染色评估吡格列酮对压力诱导的髓核干细胞凋亡的影响。采用DCFH-DA探针和JC-1探针分别检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)的改变。通过透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的改变,采用Western blot检测凋亡相关蛋白包括:cyto.cytochrome C,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达。结果:细胞流式结果和分化结果显示,分离的髓核干细胞高表达CD73,CD90和CD 105,低表达CD34和HLA-DR,并且具有成骨、成脂、成软骨的能力,提示分离的髓核干细胞符合国际干细胞治疗协会(ISCT)的干细胞标准。CCK-8结果显示吡格列酮能降低压力对细胞活性的抑制作用,LDH检测和活死细胞染色提示吡格列酮能缓解压力对髓核干细胞的毒性作用。鬼笔环肽染色显示压力能破坏髓核干细胞的骨架结构,而吡格列酮能保护压力对髓核干细胞骨架的破坏。Annexin V/PI双重染色和TUNEL染色显示,采用吡格列酮处理后,其能保护压力引起的髓核干细胞凋亡。DCFH-DA、MDA以及JC-1结果显示,吡格列酮降低压力诱导髓核干细胞内ROS和MDA的产生并进一步缓解MMP,TEM结果显示,吡格列酮能保护压力对髓核干细胞内线粒体的损伤。此外,Western-blot结果显示吡格列酮能显著降低压力引起髓核干细胞线粒体凋亡通路蛋白Bax、cyto.cytochrome C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达,而促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:吡格列酮能保护压力诱导髓核干细胞凋亡,其可能的机制与线粒体凋亡途径有关。
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