拟南芥J-蛋白基因功能的研究

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J-蛋白是一类包含J结构域的蛋白质,拟南芥中存在90多种J-蛋白基因,构成了一个多基因超家族。AtJ72、AtJ70和AtJ24是拟南芥J-蛋白家族的成员。关于这三个基因的功能还未见任何报道。本文对AtJ72、AtJ70和AtJ24这三个基因的突变体进行了生长发育过程中的表型观察和环境胁迫下的耐性分析,旨在研究这三个基因在生长发育及对环境胁迫的适应过程中的可能功能。通过PCR方法分别鉴定并获得了AtJ72、AtJ70和AtJ24基因的T-DNA插入纯合突变体,并用RT-PCR的方法对纯合突变体进行了转录水平的鉴定,各种突变体均没有产生相应基因的转录本,说明这三种基因由于T-DNA的插入而被敲除。在正常生长条件下对野生型和突变体植株进行了表型的观察及比较。结果表明,AtJ72、AtJ70和AtJ24突变体的生长发育进程与野生型植株无明显差别,主要表现在胚根、胚芽、子叶出现时间,抽苔、开花时间,以及根长、莲座半径和茎高方面。分别对野生型及几种突变体进行热,冷,冻,盐胁迫等处理。结果发现AtJ72突变体对盐胁迫的抵抗能力明显比野生型弱,而对热、冷冻和水分胁迫的耐性与野生型无明显差异,说明AtJ72基因可能与耐盐性相关。AtJ70和AtJ24突变体在热、冷冻、盐胁迫处理后,幼苗生活力与野生型均无明显差异。构建了含有融合基因的双元载体pCAMBIA1300AtJ72-GFP,将双元载体转入农杆菌GV3101,利用浸花法转化拟南芥,在抗性培养基上筛选获得阳性转基因苗。PCR扩增出融合基因AtJ72-GFP,表明抗性苗确为转基因株系。利用激光共聚焦扫描显微镜观察转基因小苗的根部细胞,以转空载体GFP作为对照,结果表明AtJ72基因可能定位在细胞壁或细胞膜上。
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