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半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)主要生长在我国近海地区,是我国重要的海水经济繁育鱼类。由于其肉质鲜美滑嫩、营养价值高、生长速度快等特点而深受人们喜爱并且被广泛养殖。随着养殖数量的增多,病害的威胁也日趋严重,尤其是鳃、皮肤和肠道由哈维氏弧菌所引起的溃烂最为严重,给养殖业带来的严重的经济损失。同时,鱼类主要的生存环境是在水体中,其中皮肤、鳃、肠等一些由大面积黏膜包被的组织是病原体侵入鱼体时首先接触的部位,因此黏膜不仅具有简单的物理隔离作用,其局部黏膜的免疫防御作用对病原的侵入更加重要[1]。由于鱼类的系统进化地位较低以及其自身具有的特性,鱼类自身的获得性免疫机制尚未完善,使得非特异性免疫在抵抗外来病原菌的过程中起到了比特异性免疫更重要的防御效用[2]。因此,从分子免疫应答方面来探究半滑舌鳎自身的免疫相关基因变得尤为紧迫。IgT是一种与硬骨鱼类的IgM和IgD不同的新型的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)基因,属于Ig超家族成员之一。本实验根据半滑舌鳎基因组数据库对半滑舌鳎的新型的免疫球蛋白IgT序列的预测,通过PCR扩增以及RACE方法得到了半滑舌鳎IgT基因cDNA全长2033 bp,开放阅读框(ORF)1794 bp,编码597个氨基酸,5’UTR为99 bp,3’UTR为140 bp。保守结构域分析显示半滑舌鳎IgT氨基酸包含一个信号肽,4个重链恒定结构域(heavy chain domain,CH)和一个跨膜结构域。经CH区2蛋白序列的同源比对和系统进化树的构建,结果发现半滑舌鳎IgT基因与牙鲆的IgT基因的进化关系最近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示:IgT基因在半滑舌鳎鳃中的相对表达水平最高,在粘液、肠、脾脏和肾脏中的相对表达水平依次减少,在肌肉中的相对表达最低;经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染一定时间后,IgT基因在半滑舌鳎的6个免疫组织中都出现一定程度的上调趋势,其中皮肤和肝脏在12 h出现峰值,肾脏在24 h出现峰值,在鳃和脾脏在48 h出现峰值,而肠到96 h时一直处于上调状态;在挑选出半滑舌鳎的抗病家系和易感家系中不同组织IgT基因的qRT-PCR结果显示在抗病家系鱼的脾脏、肠、鳃和粘液中的IgT基因的相对表达水平均高于易感家系,而肾脏和肝脏中IgT的表达水平在抗病家系和易感家系间则没有明显差别。根据这些实验结果可以推测IgT基因在半滑舌鳎抵制外来病原菌的过程中起到了关键性的效用,并为鱼类无损伤抗病力的评价、挑选抗病相关基因标记、培养抗病良种和选育抗病家系提供了候选基因。多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor,pIgR)是I型跨膜糖蛋白,属于Ig超家族的成员之一,以膜整合蛋白的形式作为多聚免疫球蛋白(pIgs)的介质,在黏膜上皮细胞内进行极性运转,在非特异性免疫与特异性免疫中均起到了重要效用[3]。本实验通过半滑舌鳎基因组数据库中预测的pIgR序列,经过PCR扩增以及RACE法方得到了半滑舌鳎pIgR cDNA全长为1419 bp,ORF为1020bp,编码339个氨基酸,5’UTR区域为109 bp,3’UTR区域为290 bp。保守结构域初步分析结果显示半滑舌鳎的pIgR氨基酸序列含有一个信号肽、两个免疫球蛋白结构域(Ig-like domain,ILD)、一个跨膜结构域。通过蛋白同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR基因与大菱鲆和牙鲆的pIgR基因进化关系最近。经qRT-PCR实验分析,发现pIgR在健康的半滑舌鳎中的9种组织里都有所表达,且在鳃里pIgR相对表达水平最高,而在肌肉中相对表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中都出现先增加后减少的规律,其中在脾和鳃中48 h出现峰值,在肝、肾和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。这些实验成果充分说明,pIgR在半滑舌鳎抵制哈维氏弧菌的反应过程中起到了主要的效用。