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研究目的:利用显微注射的方法将诱导性多能干细胞(iPSCs)移植至正常小鼠耳蜗内,观察其分化转归情况,为iPSCs的耳聋治疗提供一定的理论依据和试验基础。研究方法:1.建立稳定的小鼠iPSCs的培养体系,对稳定传代的小鼠iPSCs进行体外鉴定。2.小鼠iPSCs细胞的标记和移植:用CM-Dil染料标记iPSCs,流式细胞仪鉴定标记效率。20只正常6-8周龄SPF级CD-1/ICR鼠随机平均分为A、B两组:A组为试验组,B组为对照组,将左耳定为试验耳,实验组移植CM-Dil标记的iPSCs,对照组移植等体积的DMEM基础培养基。两组均在术前1周和术后1月对小鼠左耳行听性脑干反应(ABR)的检测。3.miPSCs耳蜗移植后分化细胞的鉴定:细胞移植1月后免疫组织荧光染色鉴定移植后的细胞是否表达毛细胞标志物(Myosin Ⅶa、Espin)和神经元细胞标志物(Nestin、Neurofilament-M)。4.miPSCs耳蜗内移植后用HE染色鉴定是否有畸胎瘤形成。结果:1.成功建立了稳定的小鼠iPSCs培养体系。稳定传代的小鼠iPSCs经AP染色鉴定阳性且可形成EBs。2.荧光染料(CM-Dil)对小鼠iPS细胞的标记效率达到96.42%。术前1周,A组、B组ABR反应阈分别为24.50±5.50dB SPL、26.00±6.15dB SPL;A、B两组术前1周的ABR反应阈比较差异无统计学意义(p=0.572>0.05)。术后1月,A组、B组ABR反应阈分别为70.50±4.97dB SPL、68.00±5.37dB SPL;A、B两组术后1月的ABR反应阈比较差异无统计学意义(p=0.295>0.05)。A、B两组ABR反应阈术后均较术前高(p值均<0.05),差异有统计学意义。3.A组小鼠耳蜗的内外淋巴内及蜗轴内均可见CM-Dil标记的小鼠iPSCs,并且部分红色荧光标记的细胞表达毛细胞标志物(Myosin Ⅶa、Espin)和神经元细胞标志物(Nestin、Neurofilament-M)。B组耳蜗内未见有红色荧光表达。4.HE染色鉴定移植miPSCs后耳蜗内可见畸胎瘤形成。结论:1.耳蜗内移植后的小鼠iPSCs可以分化为表达毛细胞标志物的细胞;2.耳蜗内移植后的小鼠iPSCs可以分化为表达神经元标志物的细胞;2.小鼠iPSCs耳蜗内移植后有形成畸胎瘤的可能;4.经圆窗径路耳蜗移植iPSCs短期内不能改善因为损伤导致的小鼠听力下降。