目的:证候理论是中医的核心理论之一,证候动物模型是揭示证候生物学基础的有力工具。我们的研究思路是以病理模型为研究载体,动态收集模型的“四诊”信息,建立以临床疾病和证候诊断标准为基础的评价体系,利用该体系对模型证候属性进行评价,同时应用蛋白质组学技术,从蛋白质差异表达的角度揭示证候的生物学基础。基于上述认识,本实验采用大鼠左冠状动脉前降支结扎模型,并从宏观表现、舌象、心功能、实验室指标和应证复方的疗效等方面对该模型进行证候属性的评价,认为该模型属于气虚血瘀证(心肌缺血),同时应用蛋白质组学技术,对假手术组和模型组心肌进行差异蛋白质群的检测,从蛋白质差异表达的角度揭示气虚血瘀证(心肌缺血)的生物学基础。方法:1造模方法和证候评价:采用雄性SD大鼠左冠状动脉前降支结扎的方法造模,以术后第3d出现4-6个异常Q波为冠脉结扎成功的标志,将成功的模型动物随机分为模型组、益气活血组和温阳利水组,同时制作假手术组(未结扎左冠状动脉前降支,其余与模型组相同),每组样本数为10,术后3天开始给药,灌胃体积为10ml/kg,假手术组和模型组10ml/kg饮用水灌胃,益气活血组给予芪参益气滴丸(天津天士力公司惠赠,主要成分黄芪、丹参、三七、降香)0.1g/kg灌胃,温阳利水组给予真武汤0.396g/kg灌胃,均相当于临床用量的6倍。给药周期为30天。证候属性的评价体系主要包括实验动物的宏观表现、舌象、心功能、实验室指标和应证复方的疗效等方面。术后第7、14、21、28d,观察实验动物的一般状态、舌象、爪甲和耳廓(将大鼠浅麻醉,标准色卡与鼠舌对比,用数码相机进行拍照,用Photoshop软件对舌的色度参数进行计算),检测体重、体温、呼吸频率、心电图(大鼠浅麻醉进行心电图收集)。术后8、15、22、29d,检测实验动物的游泳力竭时间(大鼠负重6%重物在温度30±1℃水中游泳,计算大鼠力竭时间,以大鼠头沉入水中10秒钟为力竭标志)。术后第30d,对实验动物进行超声心动图检测。术后第32d,实验动物处死,取大鼠舌尖组织作HE染色,并用放免的方法检测大鼠血浆ET、CGRP的含量。术后第32d,实验动物处死,取心肌组织分别作HE、Masson染色和TGF-β1免疫组化染色,并用放免的方法检测大鼠心肌组织TNF-α、IL-6、AngⅡ、Ald的含量。2气虚血瘀证(心肌缺血)蛋白质组学检测:术后第32天,模型组和假手术组各随机选择3只大鼠,模型组取大鼠心脏左室缺血部分,假手术组取左室正常区,分别作蛋白质双向电泳、银染、胶图分析和差异蛋白质的质谱检测。结果:1造模方法和证候评价:术后8、15、22、29d,模型组与假手术组相比游泳力竭时间显著缩短;术后22、29d,益气活血组和温阳利水组,与模型组相比均显著延长,二者之间无显著性差异。术后7、14、21、28天,模型组舌象与假手术组相比紫暗,部分出现瘀点、瘀斑, R、G、B和L显著下降;术后21、28d,益气活血组L值与模型组相比显著升高。与假手术组相比,模型组舌尖血管内径扩大,益气活血组与模型组相比,血管内径显著缩小。模型组与假手术组相比,血浆ET升高、CGRP下降;益气活血组与模型组相比,血浆ET显著下降、CGRP升高。术后第30d,模型组与假手术组相比,EF和FS显著下降;益气活血组与模型组相比,射血分数(EF)和短轴缩窄率(FS)显著增加。模型组与假手术组相比,TNF-α、IL-6、AngⅡ、Ald显著增高;益气活血组与模型组相比,TNF-α、IL-6、AngⅡ、Ald均明显下降。模型组与假手术组相比,CVF(胶原容积百分比)显著增加;益气活血组CVF与模型组相比显著减少。TGF-β1免疫组化结果显示,与假手术相比,模型组心肌组织TGF-β1表达明显增多(P<0.05);益气活血组心肌组织TGF-β1表达与模型组相比显著下降。以上结果说明,结扎大鼠左冠状动脉前降支模型属于气虚血瘀证模型。2气虚血瘀证(心肌缺血)蛋白质组学检测:气虚血瘀证(心肌缺血)模型组缺血区心肌组织苹果酸脱氢酶、铁硫蛋白8、肌浆球蛋白轻链、谷胱甘肽过氧化物酶、铜锌超氧化物歧化酶含量下降,αB-晶状体蛋白、磷酸丙糖异构酶、蛋白酶前体或α亚基含量增高。气虚血瘀证(心肌缺血)缺血区心肌蛋白质表达与能量代谢、氧化损伤以及心肌自我保护蛋白质有关。结论:1通过对左冠状动脉前降支大鼠模型从宏观表现、舌象、心功能、实验室指标和应证复方的疗效进行证候的动态观察和评价,结果显示该模型属于气虚血瘀证(心肌缺血)。2气虚血瘀证(心肌缺血)标志蛋白质群与能量代谢、氧化损伤以及心肌自我保护蛋白质有关。气虚血瘀证(心肌缺血)的外在表现是以其心肌细胞能量代谢障碍、氧化损伤、心肌细胞坏死以及心肌间质纤维化等改变为基础的。