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本文研究了温度,光照强度和培养基中KNO3浓度对极大螺旋藻(Spirulinamaxima)生长、主要成分及脂肪酸含量和组成之间的关系。培养温度的增加可以明显降低藻细胞中的蛋白质含量水平,同时藻细胞中多糖和脂类的含量得到不同程度的增加。经过气相色谱和色质联用分析,结果显示γ-亚麻酸(γ-1inolenicacid,GLA)和其它脂肪酸的含量和组成随着培养条件的变化也不同。降低温度和光照强度可以增加GLA的相对含量。在30℃,3000lx下培养7天,显示在KNO3浓度较低的培养基中的螺旋藻中GLA含量相对也较高。在无N培养基中胁迫培养96hr后,GLA占总脂肪酸的含量最大可以达到30.23%。该实验结果是目前极大螺旋藻中报道的最高含量,也为从螺旋藻中制备GLA提供有利的工业化条件。
实验中采用了固相萃取技术(SPE)和薄层层析技术(TLC)来分离分析生长于不同温度条件下的藻类中不同的脂类的含量。结果证实单半乳糖酰甘油酯(MGDG)和二半乳糖酰甘油酯(DGDG)和温度条件呈明显的正相关关系。实验还研究了不同温度下MGDG和DGDG中分子组成种类的变化情况。
实验也探讨了从极大螺旋藻中分离制备纯化GLA的下游工艺。首先不同的从藻细胞中提取总脂类的方法得到了比较,结果认为传统的Bligh-Dye提取方法有着最大的提取效率,但是CO2超临界萃取法(SFE)能够节约大量的有机溶剂,在最终产品中有较少的残留有机溶剂污染,而且采用SFE可以避免在提取过程中产生的GLA被氧化的情况,是工业化GLA制备的较佳选择。实验中优化了SFE提取总脂类的工艺参数,研究结果显示在50℃,30Mpa,夹带剂甲醇:藻粉干重(v:w)=2:1,溶剂CO2的消耗量:藻粉干重(v:w)=20:1是提取的最佳条件。同时也研究了从螺旋藻中分离纯化GLA的其它各个步骤和单元过程,比如冷冻结晶、尿素包合、分子蒸馏以及络合层析的条件。文中也提出了一套完整的工艺流程图,对以后的中试和工业化制备GLA提供了依据。
GLA对多种肿瘤细胞的杀伤作用也得到研究。实验结果指出GLA对人鼻咽癌细胞株CNE和肺腺癌细胞株SPC-A-1的半数致死浓度分别为18.83μg/ml和86.21μg/ml。实验还用MTT法分析了GLA和丝裂霉素C(MMC)联合使用对SPC-A-1的效果,数据采用Chou&Talalay的合并用药指数(CI)方法分析。结果说明在较高的细胞杀伤水平上GLA和MMC有着协同作用。
实验也研究了GLA对髓原性白血病细胞株K562生长的影响。GLA浓度在20μg/mi以上,K562的生长基本完全停止。为了比较实验还研究了二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid,EPA),α-亚麻酸(α-linolenicacid,ALA),亚油酸(linoleicacid,LA)和油酸(oleicacid,OA)对K562细胞的影响。多不饱和脂肪酸如EPA和ALA都对K562有比较明显的抑制生长效果,而LA和OA基本没有或产生很弱的对K562细胞生长产生抑制作用。实验对经过GLA处理的K562细胞中MDA水平的分析显示GLA增加了K562中总脂质过氧化产物。结果提示GLA可能通过加强细胞中脂质过氧化,从而产生大量的过氧化产物和自由基来抑制K562细胞的生长。形态学显示了经过60μg/ml的GLA作用24-72hr后的K562细胞表现了许多典型的凋亡形态,比如核固缩、细胞体积变小、出现深染色颗粒,有出泡现象等等。但是DNA琼脂糖电泳的结果中没有出现典型的DNA梯。体内的实验也证实62.73mg/Kg.day灌胃GLA10天后,对动物植性肿瘤S180和ECA有着明显的抑制效果,抑制率分别为34.19%和38.99%。