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大豆根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一,是一种典型的土传性病害,其中部分病害就是由大豆疫霉(Phytophthorasojae)侵染大豆引起的。由大豆疫霉单独引起的生产损失在世界范围内每年达到了 10-20亿美元。大豆疫霉隶属于卵菌,呈丝状生长,在进化上与藻类相近,但是与真菌相差甚远。生物信息学分析发现在大豆疫霉中存在超过400个RXLR效应分子。越来越多的研究证明,效应分子对于病原菌的侵染过程中发挥着至关重要的作用,能够从多个层面,以不同的机制完成侵染过程。利用植物表达载体对OG5<sub>154821外泌家族蛋白的功能进行研究。在大豆疫霉的基因组中存在着许多的外泌蛋白基因。除了典型的RXLR,CRN和NLP等家族外,还有许多功能未知的蛋白家族。通过生物信息学分析筛选到OG5154821外泌家族,在侵染过程中高表达。利用植物表达载体在烟草上过表达该家族的部分成员基因,筛选到候选效应分子Ps128701能够引起细胞坏死,SignalP3.0在线预测发现,该候选效应分子具有信号肽,利用酵母信号肽序列预测系统对其信号肽进行了预测发现其信号肽能够发挥功能。利用菌丝接种叶片的方法验证该候选效应分子侵染不同时间的转录情况,在0-12 h上调表达,12 h后下调。利用crispr-cas9技术将Ps128701基因从大豆疫霉P6497菌株中敲除,挑取纯和的转化子。利用游动孢子接种大豆黄化苗下胚轴验证转化子的致病性,与野生型相比,转化子的致病性并没有显著性的变化。另外在V8固体培养基上观察大豆疫霉的生长情况,根据统计结果,转化子和野生型的生长速率基本保持一致,没有显著性的变化。说明该候选效应分子对于大豆疫霉的侵染没有明显的贡献。ADA2基因在植物免疫过程中的作用。本实验室研究发现,大豆疫霉效应分子PsAvh23能够与大豆基因GmADA2-1互作从而调控植物的免疫作用。我们克隆到拟南芥中的AtADA2b,酵母双杂证明PsAvh23与拟南芥中的AtADA2b也是能够互作,这表明PsAvh23与ADA2互作在不同植物中是广泛存在的。但是,ADA2互作的关键区域和在植物防卫过程中是怎么发挥功能的尚未研究清楚。根据PsAvh23的蛋白序列特征对其进行一系列的突变,酵母双杂交证明PsAvh23的二级结构对其互作影响不大,只是轻微的减弱互作,而且这些二级结构突变体依然能够促进辣椒疫霉的侵染。进一步的突变分析发现PsAvh23的C端的两段内部重复序列(IR1、IR2)对其互作是必需的。遗传学实验发现,在烟草上表达大豆的GmADA2-1能够减弱辣椒疫霉的侵染。同时,沉默烟草中的NbADA2-1/2能够增强辣椒疫霉的侵染,这表明ADA2正调控植物的免疫反应。