禾谷孢囊线虫生防菌株的筛选及鉴定

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:lsylianyangdeyu
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小麦孢囊线虫(Heterodera avenae)是世界小麦生产上一类重要的病原物,严重威胁着我国小麦的生产。目前,在我国该病尚缺乏有效地防治措施。利用生防微生物来控制小麦禾谷孢囊线虫病被认为是一种具有发展潜力的措施。因此,本研究对小麦禾谷孢囊线虫病的生防菌株进行了筛选和鉴定,并对生防菌株的防病机理进行了探究,主要研究结果如下:1采集甘肃省永登县和天祝县等小麦禾谷孢囊线虫病田土样,采用不同的分离培养基进行菌种的分离。真菌的分离采用马丁氏培养基和PDA培养基共得到499株真菌。细菌的分离采用NA培养基共得到104株细菌菌株。2对501株真菌进行了对禾谷孢囊线虫卵的寄生试验,共筛选出27株对H.avenae的寄生率在40%以上的菌株,并对其进行了形态鉴定和rDN R-ITS分子测定。结果表明,27株真菌分属于5个属9个种。其中卵寄生率超过70%的有8株,其中长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)6株,分别为TL13、TL6、TL14、TL17、TL12和TL8,1株土曲霉(Aspergillus terreus)AT9,1株寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)AP2。通过对二龄幼虫的致死力测定,筛选得到17株细菌,并对其进行了的菌体观察和rDNR-ITS序列测定。结果表明,17株细菌分属于芽孢杆菌属的15个种。72h后对J2的致死率在90%以上的菌株有B10、B20、B24、B26和B30。经鉴定B10为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),B20为壁芽孢杆菌(Bacillus muralis),B24为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),B26为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),B30鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。3对筛选得到的部分生防真菌进行了作用方式的探究,结果表明,长梗木霉(T.longibrachiatum)对J2的致死率为92.97%,卵寄生率为77.67%,卵孵化的抑制率分为70%。土曲霉(A.terreus)对J2的致死率为90.40%,卵寄生率为74.33%,卵孵化的抑制率为66.20%。寄生曲霉(A.parasiticus)对J2的致死率为68.13%,卵寄生率为70.00%,卵孵化抑制率为66.20%;同时试验结果表明,相同的菌株来源不同,卵寄生作用,孵化抑制作用和对J2的致死作用也表现出很大的差异。生防细菌作用方式结果表明,J2致死率超过90%和卵孵化抑制率超过50%的细菌有5种。壁芽孢杆菌(B.muralis)对J2致死率和卵孵化的抑制率分别为100%和63.07%。甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)对J2致死率和卵孵化的抑制率分别为100%和57.20%。苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)对J2致死率和卵孵化的抑制率分别为98.80%和67.57%。蜡状芽孢杆菌(B.cereus)对J2致死率和卵孵化的抑制率分别为96.73%和70.27%。解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)对J2致死率和卵孵化的抑制率分别为93.63%和66.67%。4通过对不同季节孢囊寄生真菌的分离试验,共分离得到7个属10个种的真菌。其中镰刀菌属(Fusarium spp.)分离频率为59.3%;链格孢属(Alternaria spp.)分离频率为17.8%;曲霉属(Aspergillus spp.)分离频率为2.6%;木霉属(Trichoderma spp.)分离频率为3.2%;青霉属(Penicillium spp.)分离频率为12%;茎点霉属(Phoma medicaginis)分离频率为4.2%;蓝状菌属(Talaromyces spp.)分离频率为0.8%。4个季节孢囊优势寄生菌为产黄青霉(P.chrysogenum)、茄腐镰刀菌(F.solani)、尖孢镰刀菌(F.oxysporum)和链格孢菌(A.alternate),这4种真菌春夏秋冬均可分离得到。其次,分离频率较高的有茎点霉(P.medicaginis),长梗木霉(T.longibrachiatum)。寄生曲霉(A.parasiticus)是冬季偶发种,烟曲霉(A.fumigates)是春季偶发种,多变篮状菌属(T.variabilis)是秋季偶发种,肉色曲霉(A.carneus)是夏季偶发种,其它季节未分离到。
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