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目的:观察As2O3与Aspirin联合应用对胃癌细胞骨架的影响及其与癌转移的关系,并探讨其可能机制。
方法:
1.体外实验:人胃癌SGC-7901细胞体外常规培养,给予单独或联合应用As2O3和Aspirin72h后,采用免疫荧光染色和FITC-phalloidin特异性标记,分别显示微管和微丝,采用激光扫描共聚焦显微镜观察SGC-7901细胞微丝微管的形态和分布;Westernblot方法对Actin、Tubulin和RhoA蛋白表达进行半定量分析;
2.体内实验:建立高转移性615小鼠前胃癌(MFC)模型,用As20O、Aspirin单独及联合作用后,HE染色观察胃癌移植瘤细胞生长情况;透射电子显微镜观察移植瘤细胞骨架的形态和分布;Western blot半定量检测Actin,Tubulin和RhoA蛋白的表达;肺组织微转移灶计数方法计算移植瘤肺转移的情况。
结果:
1.激光扫描共聚焦显微镜观察显示As2O3和Aspirin均可影响SGC-7901细胞微丝和微管的形态和分布,联合应用比单独应用作用更明显,尤其是高剂量联合组细胞变小变圆,细胞骨架正常网状结构遭到显著破坏,胞质内丝状纤维少见,可见大量颗粒状荧光,聚集成团,胞膜下出现荧光增厚区,在电镜下很少见到微丝和微管。
2.Western blot检测SGC-7901细胞Actin,Tubulin和RhoA蛋白表达:Aspirin单独应用对Actin和Tubulin蛋白表达影响不明显,特别是1mmol/L Aspirin对Actin和Tubulin蛋白表达均无影响(均为P＞0.05),而2mmol/L Aspirin对Tubulin蛋白表达亦无影响(P＞0.05);低剂量联合组Actin和Tubulin蛋白表达多已低于Aspirin或As2O3单独应用组(P＜0.05);高剂量联合组降低Actin和Tubulin蛋白表达作用明显,与其他各组的差异均有统计学意义(均为P＜0.05)。
RhoA蛋白检测显示与Actin和Tubulin蛋白表达相似的结果,除1和2mmol/LAspirin单独应用组外,其它各组RhoA蛋白表达均低于对照组(均为P＜0.05);低和高剂量联合组低于Aspirin或As2O3单独应用组(P＜0.05);高剂量联合组又低于低剂量联合组(P＜0.05)。
3.615小鼠前胃癌移植瘤组织Actin,Tubulin和RhoA蛋白表达结果同上。体外体内实验Actin和Tubulin与RhoA蛋白的表达均呈显著正相关(体外:r=0.890,P＜0.05:r=0.773,P＜0.05:1本内:r=0.867,P＜0.05:r=0.900,P＜0.05)。
4.肿瘤肺转移发生率对照组和Aspirin组均为100％,As2O3组87.5％(7/8),半量联合组75.0％(6/8),联合用药组66.7％(4/6)。各组平均肺转移灶数依次为:16.80±4.55个、11.50±2.74个、8.13±4.80个、5.00±2.62个和2.33±2.73个,各用药组均显著低于生理盐水对照组(均P＜0.05),且联合组也显著低于其他各用药组(P＜0.05);Aspirin组、As2O3组、半量联合组及联合用药组各药物抗移植瘤转移率分别为:31.5％、51.7％、70.2％、86.1％。
结论:
1.As2O3与Aspirin单独及联合应用可以改变肿瘤细胞内微丝和微管的结构和分布,As2O3的作用较Aspirin明显,两药联合作用增强。
2.As2O3与Aspirin单独及联合应用可抑制Actin和Tubulin尤其是Tubulin蛋白的表达,两药联合作用增强。Aspirin主要作用于Actin蛋白,而对Tubulin的影响不明显;As2O3则对Actin和Tubulin蛋白表达都有明显的抑制作用。
3.As2O3与Aspirin单独及联合应用可抑制RhoA蛋白的表达,而RhoA与Actin和Tubulln蛋白表达有关。
4.As2O3与Aspirin单独及联合应用均可抑制MFC移植瘤肺转移,联合用药作用增强。
5.As2O3与Aspirin抑制615小鼠前胃癌(MFC)移植瘤转移可能与下调RhoA表达,进而使Actin和Tubulin的表达下降,同时影响细胞内细胞骨架结构。