【摘 要】
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粒毛盘菌属是一类腐生性真菌,在深层培养条件下能产生多糖、色素、多酚等多种活性物质。本文以粒毛盘菌YM38发酵液分离纯化的胞外多糖LEP-1a为研究对象,对其进行基本结构表征、模拟消化、化学修饰以及体内外生物活性研究。主要的研究结果如下:（1）采用HPGPC、IC、GC-MS、FT-IR和NMR等方法研究分析得出LEP-1a的分子量为5.69×10~4 Da,由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,摩尔比为9
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粒毛盘菌属是一类腐生性真菌,在深层培养条件下能产生多糖、色素、多酚等多种活性物质。本文以粒毛盘菌YM38发酵液分离纯化的胞外多糖LEP-1a为研究对象,对其进行基本结构表征、模拟消化、化学修饰以及体内外生物活性研究。主要的研究结果如下:（1）采用HPGPC、IC、GC-MS、FT-IR和NMR等方法研究分析得出LEP-1a的分子量为5.69×10~4 Da,由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,摩尔比为9.4:14.6:76.9。糖苷键类型包括（1→）、（1→3）、（1→4）和（1→2,6）链接的甘露糖,（1→2）链接的半乳糖以及（1→2）链接的葡萄糖。采用体外模拟唾液-胃肠道消化体系,研究发现唾液对LEP-1a的消化特性影响较小,而经过胃肠道消化后,其还原糖含量升高,且分子量下降,表明LEP-1a可部分降解。此外,胃肠道消化显著提高了LEP-1a的体外结合能力、抗氧化、降血糖和益生元活性。（2）分别采用锌和硒对LEP-1a进行化学修饰,获得了ZnLEP-1a和SeLEP-1a,其中ZnLEP-1a中锌含量为0.69±0.03 mg/g,SeLEP-1a中硒含量为206.99±9.85μg/g。由SEM和AFM发现锌和硒修饰后LEP-1a的表观形貌均发生明显改变。FT-IR和NMR分析结果进一步证实ZnLEP-1a和SeLEP-1a修饰成功。ZnLEP-1a的红外吸收峰发生位移,SeLEP-1a红外光谱出现新的吸收振动峰。NMR结果表明,ZnLEP-1a在~1H NMR图谱中质子信号减弱,SeLEP-1a在13C NMR图谱上的标志新峰出现在62.62 ppm处,归属于O-6取代碳。体外生物活性实验表明与LEP-1a相比,ZnLEP-1a和SeLEP-1a具有更强的抗氧化和抗肿瘤活性。（3）为了研究LEP-1a和ZnLEP-1a对小鼠急性肝损伤的保护作用,建立顺铂（CP）诱导的急性肝损伤模型。研究表明LEP-1a和ZnLEP-1a有效降低了小鼠肝指数、提高肝脏功能、改善肝脏氧化应激。同时,与模型组相比,LEP-1a和ZnLEP-1a能够显著抑制小鼠TNF-α和IL-1β的表达。肝脏组织病理学染色也证明了给与LEP-1a和ZnLEP-1a干预后,炎性细胞浸润明显减少。表明LEP-1a和ZnLEP-1a是通过提高小鼠肝脏抗氧化能力和抑制炎症因子产生而抑制肝损伤,发挥保肝作用。（4）为了研究LEP-1a和SeLEP-1a的肾保护作用及其机制,建立顺铂诱导的急性肾损伤模型。研究表明LEP-1a和SeLEP-1a干预可显著逆转由顺铂诱导的小鼠肾指数下降以及CRE和BUN水平的增加。LEP-1a和SeLEP-1a干预可通过恢复抗氧化酶活性和非酶GSH含量来改善肾脏氧化应激。与模型组相比,LEP-1a和SeLEP-1a干预显著降低小鼠肾组织中炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的以及KIM-1的含量。同时,免疫组化结果表明LEP-1a和SeLEP-1a可抑制小鼠肾脏炎症介质COX-2和i NOS的释放,增加Nrf2和HO-1的表达。PCR结果显示SeLEP-1a可显著抑制TLR4、NF-κB p65、IκBα的m RNA表达水平。此外,LEP-1a和SeLEP-1a明显地下调肾脏组织中Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平和上调p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达水平。因此,LEP-1a和SeLEP-1a干预是通过调节氧化应激反应、NF-κB介导的炎症反应以及PI3K/Akt介导的凋亡信号通路改善顺铂诱导的急性肾损伤。
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