【摘 要】
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目的:探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法(methylene blue-mediated photodynamic therapy,MB-PDT)对体外和炎症牙周组织中巨噬细胞的作用及机制。方法:体外实验中,将THP-1巨噬细胞分为3组:对照组(Control组)、MB组和MB-PDT组;对照组不接受任何处理,MB组和MB-PDT组分别接受光敏剂MB处理和接受MB联合激光处理;随后检测3组细胞的凋亡情况
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目的:探讨亚甲基蓝介导的光动力疗法(methylene blue-mediated photodynamic therapy,MB-PDT)对体外和炎症牙周组织中巨噬细胞的作用及机制。方法:体外实验中,将THP-1巨噬细胞分为3组:对照组(Control组)、MB组和MB-PDT组;对照组不接受任何处理,MB组和MB-PDT组分别接受光敏剂MB处理和接受MB联合激光处理;随后检测3组细胞的凋亡情况及凋亡相关基因、蛋白的表达。体内实验中,通过正畸钢丝结扎SD大鼠上颌双侧第一磨牙+接种牙周致病菌诱导牙周炎,6周后16只大鼠去除结扎丝并取4只验证牙周炎建模成功,剩余12只大鼠接受龈下刮治术和根面平整术(scaling and root planning,SRP)治疗后随机分为3组:SRP组、MB组和MB-PDT组;SRP组仅用生理盐水治疗,MB组和MB-PDT组分别为用光敏剂MB治疗和用光敏剂MB联合激光治疗。所有大鼠在接受治疗3周(每周1次)后过量麻醉处死,并检测各组大鼠牙槽骨吸收情况和炎症因子水平,以及牙周组织中巨噬细胞的浸润数量和凋亡情况。结果:体外实验中,光动力处理模式为10μM MB和40J/cm~2的光剂量组合可引起50%以上THP-1巨噬细胞死亡和诱导最多的细胞凋亡。MB-PDT首先诱使巨噬细胞线粒体中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平增高,细胞内促凋亡基因Bax/抑凋亡基因Bcl-2的比值上调,随后胞浆中细胞色素C蛋白增多,激活内源性凋亡途径,并最终导致巨噬细胞凋亡。另外,加入外源性抗氧化剂谷胱甘肽(glutathione,GSH)和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK后显著降低了MB-PDT诱导的巨噬细胞凋亡。体内实验中,MB-PDT组大鼠的牙周组织中巨噬细胞浸润数量显著低于SRP组和MB组(P<0.05)。经MB-PDT治疗后,大鼠炎症牙周组织中浸润的巨噬细胞发生凋亡,而SRP组和MB组大鼠未发现凋亡的巨噬细胞。Micro CT、PCR和Elisa和检测结果示MB-PDT组大鼠的牙槽骨吸收程度和牙周组织炎症水平较SRP组和MB组轻(P<0.05),而SRP组和MB组大鼠间无明显差异。结论:亚甲基蓝介导的光动力疗法可减少炎症牙周组织中过度浸润的巨噬细胞并诱导其发生凋亡,同时缓解了牙周炎症状,较单纯的SRP治疗而言是一种良好的牙周炎辅助治疗方法。
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