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植物远缘体细胞杂交难以再生植株成为限制其发展的瓶颈,本实验之前,科间体细胞杂交再生植株仅有几例。利用体细胞杂交技术转移并提高中药材有效成分的研究刚刚开始,仅见胡萝卜与西洋参体细胞杂种有效成分含量测定的报道。 本论文开展了柴胡与藏药材四数獐牙菜的远缘科间植物不对称体细胞杂交研究,建立了体细胞杂交再生植株的实验体系;研究了亲缘关系、UV剂量对杂种植株再生、表型及染色体消减和片段化的影响;分析了四数獐牙菜有效成分及其醇溶性成分在两类型杂种植株中的变化及其与核基因组组成的关系。 主要实验结果如下: 选用藏药材四数獐牙菜作供体,柴胡作受体,通过对称融合(供体未经紫外线照射)及不对称融合(供体经380uW/cm~2的UV照射30sec、60sec)的方法,获得了科间体细胞杂种再生植株: 1) 柴胡与四数獐牙菜对称及不对称融合中,对称融合组合Ⅰ再生45个克隆,不对称融合组合Ⅱ再生22个克隆,组合Ⅲ再生19个单细胞克隆。对称融合的克隆Ⅰ—3及不对称融合的克隆Ⅲ—4分化出再生植株。来自Ⅰ—3的再生植株苗丛生,表型偏向供体四数獐牙菜。来自Ⅲ—4的再生植株,叶片细长,表型偏向受体柴胡。 2) 对不同组合的再生克隆进行了染色体、同工酶及RAPD检测,确认它们为体细胞杂种。RAPD分析发现,各再生克隆均存在双亲的核DNA及重组DNA。杂种克隆的核基因组组成以受体(柴胡)RAPD谱带为主,供体(四数獐牙菜)DNA谱带较少,只有对称融合的克隆Ⅰ—3供体DNA谱带较多。GISH结果显示,无论是对称还是不对称融合产生的体细胞杂种中均发生异源染色体的易位。除克隆Ⅰ—3含有1~3条完整的供体染色体及3~7个重组染色体外,其余杂种克隆仅含2~5个重组染色体。叶绿体特异性引物的SSR分析表明,除对称融合克隆Ⅰ—3的叶绿体基因组含有双亲DNA谱带外,其余杂种克隆仅有柴胡特征带。 3) 来自克隆Ⅰ—3和Ⅲ—4的再生植株RAPD分析均出现双亲特征谱带及新