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猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是一种高度接触传染性的猪肠道病原,感染猪只主要表现为急性水样腹泻、呕吐、脱水等临床症状,在不同年龄段的猪群中均可造成感染,尤其对哺乳仔猪造成较高的死亡率。PEDV疫情在大多数产猪亚洲国家不断发生,自2010年,我国出现PEDV的变异株以来,尽管之前猪群接受过CV777疫苗的免疫,但是变异株对我国养猪业造成了巨大的经济损失。目前PEDV感染后还没有有效的治疗方法,用抗生素、中草药、抗病毒疗法都效果不佳,且存在较大的毒副作用。而卵黄抗体具有对病毒的预防和治疗的优良特性已被研究者证实并接受。卵黄抗体（Immunoglobulin of yolk,IgY）是从经过特定病原免疫的鸡所产鸡蛋蛋黄中提取出来的免疫球蛋白。具有特异性强,无毒副作用,不产生毒性残留,无抗药性的一种环境友好型生物制剂。本实验对分离的PEDV进行灭活制备免疫原免疫蛋鸡,从鸡蛋蛋黄中提取高浓度的抗PEDV卵黄抗体,并对提取纯化的卵黄抗体性状和特性进行检验,用于PEDV的预防和治疗。主要研究结果如下:1.采集了2017-2018年期间来自河南省的10个规模化养猪场19批50份临床症状表现为腹泻、脱水和呕吐的疑似PEDV阳性的小肠样品,利用RT-PCR法对病料的基因组进行PEDV病原的检测。其中,PEDV阳性病料为13批,总的批次阳性率高达到了68.4%。2.对检测出的PEDV阳性病料进行病毒分离,将7份样品接种与Vero细胞后出现典型的PEDV细胞病变。将分离出的PEDV毒株再次接种Vero细胞,进行IFA鉴定。结果显示,接种PEDV组Vero细胞出现特异性荧光。成功分离7株PEDV病毒。对其中的5株PEDV病毒株进行病毒毒价测定。结果显示,PEDV新毒株毒价在103.5-106.0TCID50/mL之间,进行PEDV S基因的扩增,并对病毒S基因进行测序分析,通过S基因的同源性分析和系统进化树构建分析得出,PEDV171120株S基因发生插入,属于当前流行毒株,对其进行灭活作为蛋鸡免疫原毒株。3.采用水稀释-饱和硫酸铵法对蛋黄中的卵黄抗体进行分离提取纯化,将抗体蛋白利用SDS-PAGE电泳跑蛋白胶,显示出两条目的蛋白条带,有清晰的重链和轻链条带,经测得卵黄抗体浓度最高达8.9mg/mL,利用商品化试剂盒对卵黄抗体的效价进行测定,在酶标仪下测得OD450最高为2.876,说明纯化出的卵黄抗体具有较高的浓度。利用ELISA方法对血清中抗体进行测定,观察随时间推移抗体效价的动态变化;采用终点法测定测定PEDV中和抗体,固定病毒—稀释血清法,细胞实验显示,IgG抗体在1:1024稀释度下具有中和作用,IgY抗体在1:512稀释度下具有中和作用。说明卵黄抗体具有较强的中和活性。4.将纯化出的卵黄抗体应用到临床试验,分别采用先攻毒再饲喂卵黄抗体和先饲喂卵黄抗体再来检验卵黄抗体的预防和保护效力。对仔猪流行性腹泻的预防效率达到60%,治愈率达到80%。5.对实验动物进行临床剖检,采用荧光定量法对仔猪十二指肠、空肠前端、空肠中端、空肠末端、回肠各部分进行病毒含量测定。结果显示空肠段病毒含量最高,十二指肠、回肠段病毒含量较低。同时对各段组织进行免疫组化鉴定,结果同样显示空肠段病毒定殖最多,十二指肠、回肠段病毒定殖较少。