多巴胺在较温和的环境中即能氧化自聚,在各种材料表面形成聚多巴胺薄膜涂层,该涂层因富含活性基团而成为生物分子引入的有利表面。为了在同一表面引入更多种生物分子,于是考虑到,能否在多巴胺自聚合的时候将一种具有特定功能(如抗凝血)的生物分子交联固定到材料表面,并使得由此获得的薄膜仍然保持着普通聚多巴胺层的可固定生物分子的二次反应活性,也就是使得所制备的薄膜同时满足两个条件：一是具有良好的特定生物功能(如抗凝血性能),二是仍然可以为其它功能生物分子的引入提供平台,关于这一研究还未见有相关报道。本文利用多巴胺和肝素共混自聚合,在钛表面构建多巴胺-肝素复合膜,即首先将多巴胺和肝素溶液共混制备多巴胺-肝素复合物溶液,然后改变pH值,在多巴胺自聚合的时候将肝素交联固定到钛表面,获得可多功能化的抗凝血薄膜。在上述多巴胺-肝素抗凝血薄膜上引入Arg-Gly-Asp (RGD)多肽,同时调节固定方法,实现抗凝血和促内皮功能的平衡。以期望实现生物材料表面抗凝血和促内皮双功能化,为多功能化的实现奠定基础。首先设置多巴胺与肝素的不同浓度及不同沉积时间来制备多巴胺-肝素复合膜,并利用肝素定量和活性检测、表面亲水性检测、血小板粘附及定量检测和活化部分凝血活酶时间(APTT)测定等进行工艺优化,确定为在多巴胺-肝素复合物溶液中沉积时间为12h,多巴胺和肝素投料终浓度分别为7.4和10mg／mL。然后,在多巴胺-肝素抗凝血薄膜上固定不同浓度RGD多肽,通过观察血小板粘附和激活情况、细胞培养实验进行工艺优化,确定固定RGD多肽的最佳浓度为1μg／mL再采用傅立叶变换红外光谱(FTIR)对纯化后的多巴胺-肝素复合物进行表征,结果表明多巴胺与肝素复合成功。利用X射线光电子能谱(XPS)、免疫荧光染色、水接触角测定及酶联免疫吸附试验(ELISA)等手段对已优化出的肝素和多肽修饰样品进行材料学表征,结果证实,肝素成功固定到材料表面并且保持较高的活性,说明利用多巴胺和肝素共混自聚合能够在钛表面构建多巴胺-肝素复合膜；RGD多肽成功固定到多巴胺-肝素复合膜上,这表明肝素多肽修饰表面构建成功,同时也可以初步证明多巴胺-肝素复合膜仍然保持着普通聚多巴胺层的可固定生物分子的二次反应活性,可以认为具有固定其它功能分子的潜能。最后,利用溶血率测试、凝血时间测定、血小板粘附及动态全血实验对优化后的样品进行血液相容性表征,结果显示,在面表钛评价沉积肝素-多巴胺复合膜之后,表面血液相容性显著提高,能够有效抑制血小板粘附和激活,抑制红细胞吸附和聚集,显著延长活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)值；并且固定RGD多肽后,表面仍具有较好的血液相容性。通过脐静脉内皮细胞培养、形态观察、数量统计及覆盖率统计等,来评价优化后样品对内皮细胞的作用,结果表明,多巴胺-肝素抗凝血薄膜明显抑制了内皮细胞在材料表面粘附、铺展和增殖,而固定RGD多肽后,材料表面对内皮细胞粘附的影响恢复到与纯钛相当的水平,对内皮细胞铺展和增殖的促进作用随时间延长显著优于纯钛。因此,利用多巴胺和肝素共混自聚合构建的多巴胺-肝素复合膜显著改善了钛的血液相容性,并且该复合膜能够为其它功能分子固定提高平台。RGD多肽的引入,成功构建了具有良好抗凝血／促内皮双功能性能的表面。