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背景和目的甲状腺癌是常见的恶性肿瘤之一,甲状腺肿瘤中有5%-10%为甲状腺癌,女性发病率较高。其中分化型甲状腺癌占90%,包括来源于甲状腺滤泡上皮细胞的甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)和甲状腺滤泡癌(follicular thyroid carcinoma, FTC),甲状腺未分化癌(undifferentiated thyroid carcinoma, UTC)较为少见,另外还有来源于甲状腺滤泡旁细胞的甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma, MTC)。不同组织类型的甲状腺癌其恶性程度及转移方式也不同,但都具有侵袭性强和易转移的特点。甲状腺乳头状癌早期易发生淋巴结转移,甲状腺滤泡癌则主要通过血道转移。甲状腺癌患者的预后与癌细胞的侵袭和转移密切相关。因此,检测恶性甲状腺肿瘤标志物结合肿瘤浸润转移能力的评估,有利于甲状腺癌的早期诊断、鉴别诊断及治疗方案的选择。完整的基底膜和细胞外基质是阻碍肿瘤细胞浸润和转移的天然屏障,而淋巴道转移是大部分肿瘤最常见的转移方式,有无淋巴结转移也是判断患者预后的重要指标。高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1, HMGB1)是一类非组蛋白的核蛋白,现已发现HMGB1与多种肿瘤的侵袭和转移有关。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)与恶性肿瘤的浸润和转移密切相关,其机制可能是由于在较大的肿瘤组织内部,坏死的肿瘤细胞释放出HMGB1到周围环境,从而作用于纤溶系统破坏基底膜和细胞外基质所致。血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C, VEGF-C)可由肿瘤细胞通过自分泌或者旁分泌方式生成,从而诱导肿瘤淋巴管的形成,并促进肿瘤的转移。HMGB1可激活MAPK、NF-kB等途径,这些信号通路在部分肿瘤中已被证明与MMP-9和VEGF-C的表达调节有关。目前关于HMGB1和MMP-9、VEGF-C在甲状腺癌中相互作用关系的研究尚未见报道。本研究的目的在于了解HMGB1、MMP-9及VEGF-C的表达与甲状腺癌发生发展的关系及它们三者之间潜在的相关性,为甲状腺癌的诊断、治疗及预后评估提供实验基础和理论依据。方法1.应用免疫组织化学SP法和原位杂交技术检测郑州大学第一附属医院2008年1月-2010年12月间手术切除并经病理证实的甲状腺组织标本,包括96例甲状腺癌组织(58例乳头状癌组织、20例滤泡癌组织、18例髓样癌组织)和55例非癌组织(20例甲状腺腺瘤组织、25例结节性甲状腺肿组织、10例正常甲状腺组织)中HMGB1、MMP-9、VEGF-C蛋白和HMGB1mRNA的表达。2.统计学处理：所有的数据经SPSS17.0统计学软件进行分析,两两阳性率的比较采用x2检验,两变量间相关关系的研究采用Spearmen相关分析。检验水准α=0.05。结果1. HMGB1蛋白在甲状腺癌组织中表达的阳性率为68.75%(66/96),在甲状腺腺瘤组织中表达的阳性率为30.00%(6/20),在结节性甲状腺肿组织中表达的阳性率为20.00%(5/25), HMGB1蛋白在正常甲状腺组织中无表达。HMGB1蛋白在甲状腺癌组织中的表达明显高于非癌组织,差异有统计学意义(P<0.05),HMGB1蛋白在三种非癌组织间两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1蛋白在滤泡癌组织中表达的阳性率高于乳头状癌组织及髓样癌组织,分别为75.00%(15/20)、72.41%(42/58)、50.00%(9/18),前者与后两者两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1蛋白的表达随着甲状腺癌直径的增大而呈逐渐升高趋势,在肿瘤直径≥1.0cm和<1.0cm组中的阳性率分别为76.19%(48/63)和54.55%(18/33),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1蛋白与淋巴结转移密切相关,在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中表达的阳性率分别为79.59%(39/49)和57.45%(27/47),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1蛋白在甲状腺癌男性组中表达的阳性率为60.71%(17/28),在女性组中表达的阳性率为72.06%(49/68),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05);HMGB1蛋白在甲状腺癌≥45岁年龄组中表达的阳性率为72.22%(39/54),在<45岁年龄组中表达的阳性率为64.29%(27/42),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05),故HMGB1蛋白和甲状腺癌患者的性别及年龄均无关。2.MMP-9蛋白在甲状腺癌组织中表达的阳性率为66.67%(64/96),在甲状腺腺瘤组织中表达的阳性率为35.00%(7/20),在结节性甲状腺肿组织中表达的阳性率为32.00%(8/25),在正常甲状腺组织中表达的阳性率为20.00%(2/10)。MMP-9蛋白在甲状腺癌组织中的表达明显高于其在非癌组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),MMP-9蛋白在三种非癌组织间两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。MMP-9蛋白在滤泡癌组织中表达的阳性率显著高于乳头状癌组织及髓样癌组织,其阳性率分别为90.00%(18/20)、62.07%(36/58)、55.56%(10/18),前者与后两者两两比较后差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白的表达随着甲状腺癌直径的增大而呈逐渐升高趋势,在肿瘤直径≥1.Ocm和<1.Ocm组中的阳性率分别为74.60%(47/63)和51.52%(17/33),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白与淋巴结转移密切相关,在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中表达的阳性率分别为77.55%(38/49)和55.32%(26/47),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9蛋白在甲状腺癌男性组中表达的阳性率为64.29%(18/28),在女性组中表达的阳性率为67.65%(46/68),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05)；MMP-9蛋白在甲状腺癌≥45岁年龄组中表达的阳性率为66.67%(36/54),在<45岁年龄组中表达的阳性率为66.67%(28/42),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05),故MMP-9蛋白和甲状腺癌患者的性别及年龄均无关。3. VEGF-C蛋白在甲状腺癌组织中表达的阳性率为69.79%(67/96),在甲状腺腺瘤组织中表达的阳性率为15.00%(3/20),在结节性甲状腺肿组织中表达的阳性率为12.00%(3/25),在正常甲状腺组织中表达的阳性率为10.00%(1/10)。VEGF-C蛋白在甲状腺癌组织中的表达明显高于其在非癌组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),VEGF-C蛋白在三种非癌组织间两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。VEGF-C蛋白在乳头状癌组织中表达的阳性率高于滤泡癌组织及髓样癌组织,其阳性率分别为81.03%(47/58)、55.00%(11/20)、50.00%(9/18),前者与后两者两两比较后差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF-C蛋白与淋巴结转移密切相关,在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中表达的阳性率分别为79.59%(39/49)和59.57%(28/47),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF-C蛋白在肿瘤直径≥1.0cm和<1.Ocm组中表达的阳性率分别为74.60%(47/63)和60.61%(20/33),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05)VEGF-C蛋白在甲状腺癌男性组中表达的阳性率为71.43%(20/28),在女性组中表达的阳性率为69.12%(47/68),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05)VEGF-C蛋白在甲状腺癌≥45岁年龄组中表达的阳性率为74.07%(40/54),在<45岁年龄组中表达的阳性率为64.29%(27/42),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05),故VEGF-C蛋白和甲状腺患者性别、年龄及癌组织大小均无关。4. HMGB1mRNA在甲状腺癌组织中表达的阳性率为52.08%(50/96),在甲状腺腺瘤组织中表达的阳性率为10.00%(2/20),在结节性甲状腺肿组织中表达的阳性率为8.00%(2/25),HMGB1mRNA在正常甲状腺组织中无表达。HMGB1mRNA在甲状腺癌组织中的表达明显高于其在非癌组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),HMGB1mRNA在三种非癌组织间两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1mRNA在滤泡癌组织中表达的阳性率高于乳头状癌组织及髓样癌组织,其阳性率分别为60.00%(12/20)、53.45%(31/58)、38.89%(7/18),三者两两比较后差异无统计学意义(P>0.05)。HMGB1mRNA的表达随着甲状腺癌直径的增大而呈逐渐升高趋势,在肿瘤直径≥1.Ocm和<1.0cm组中的阳性率分别为60.32%(38/63)和36.36%(12/33),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1mRNA与淋巴结转移密切相关,在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中表达的阳性率分别为63.27%(31/49)和40.43%(19/47),两者比较后差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1mRNA在甲状腺癌男性组中表达的阳性率为42.86%(12/28),在女性组中表达的阳性率为55.88%(38/68),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05)；HMGB1mRNA在甲状腺癌≥45岁年龄组中表达的阳性率为55.56%(30/54),在<45岁年龄组中表达的阳性率为47.62%(20/42),两者比较后差异无统计学意义(P>0.05),故HMGB1mRNA和甲状腺癌患者的性别及年龄均无关。5.在甲状腺癌组织中,HMGB1蛋白和HMGB1mRNA的表达呈正相关(r=0.253, P<0.05); HMGB1蛋白和MMP-9蛋白的表达呈正相关(r=0.238, P<0.05); HMGB1蛋白和VEGF-C蛋白的表达呈正相关(r=0.242,P<0.05)；MMP-9蛋白和VEGF-C蛋白的表达呈正相关(r=0.209,P<0.05)。结论1. HMGB1、MMP-9、VEGF-C可能和甲状腺癌的发生发展有关；VEGF-C可能和甲状腺癌的淋巴结转移有关。2. HMGB1、MMP-9、VEGF-C在甲状腺癌中的表达呈正相关,提示三者可能在甲状腺癌的发生发展及侵袭转移过程中发挥了协同作用。3. HMGB1蛋白和HMGB1mRNA在甲状腺癌中均高表达,提示HMGB1蛋白的表达调控可能起始于转录阶段。