美洲雁源金黄色葡萄球菌β溶血素基因原核表达和免疫原性分析

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对采自美洲雁的细菌菌株的菌体形态、菌落形态、培养特性、溶血特性、生化特性、致病力和16s rRNA基因进行鉴定,结果符合金黄色葡萄球菌特征,与参考菌株ATCC14458株16s rRNA基因序列同源性为97%,确定为金黄色葡萄球菌TLJ株。   利用PCR扩增了金黄色葡萄球菌TLJ株β溶血素(β-HL)基因,并进行了序列分析。结果β-HL基因长度为长993bp的一段序列,与参考株的β-HL基因核苷酸同源性在98.5%~99.8%之间。   构建β-HL基因与原核表达载体pGEX-6p-1重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导,表达G-β-HL(β-HL融合蛋白),进行SDS-PAGE和WesternBlot分析,分子量约63.4KDa,能与金黄色葡萄球菌阳性血清发生特异性的免疫反应。   用G-β-HL和生理盐水免疫健康鸡,四次免疫后,两组鸡同时用美洲雁源金黄色葡萄球菌TLJ株攻毒,每羽1×108cfu/ml颈部多点注射0.1ml,结果融合蛋白G-β-HL攻毒组保护率为66.7%,对照组鸡全部死亡。表明融合蛋白G-β-HL具有免疫保护力。
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