皖南尖吻蝮蛇毒锌金属蛋白酶A和C/七号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶三维结构与功能关系的研究

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1.皖南尖吻蝮蛇毒锌金属蛋白酶A和C三维结构与功能关系研究。皖南尖吻蝮蛇毒弱出血型P-I-B亚类锌金属蛋白酶acutolysinC的晶体结构在2.2A分辨率获得解析。晶体空间群为p2<,1>2<,1>2<,1>,晶胞参数为a=46.84A,b=49.52A,c=95.34A,晶体学不对称单位含一个蛋白质分子。皖南尖吻蝮蛇毒强出血型P-I-A亚类锌金属蛋白酶acutolysinA在pH5.0(低活力)和pH7.5(高活力)状态下的晶体结构,在以cDNA序列替代已发表的"晶体学序列"的基础上分别在1.90和1.95分辨率得到了进一步修正,晶体学R因子分别为0.168和0.187.蛇毒锌金属蛋白酶的蛋白水解活性依赖于pH值的大小。P-1类蛇毒锌金属蛋白酶的活性中心凹隙构象相似,其体积大小并不与结晶pH值和蛋白水解活力直接相关。P-1类蛇毒锌金属蛋白酶的总体结构相似,但相关的同源蛋白晶体结构比较结果表明,晶体结构彼此之间的较大差异出现在小亚结构域的αE螺旋和一个无规卷曲片段(残基153~161)。2.七号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶三维结构与功能关系研究。七号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI)的晶体结构在1.85A分辨率下获得解析,最终晶体学R因子和自由R因子分别为0.166和0.219.晶体的实间群为p2<,1>2<,1>2<,1>,晶胞参数为a=87.976A,b=98.836A,c=93.927A,晶体学不对称单位含两个单体。每个单体由两个结构域组成,N-末端的大结构域(残基1~320)由一个8股α/β桶组成,C-末端的小结构域(残基321~387)为环状结构,其中有五段螺旋。木糖异构酶分子在晶体中以非晶体学222对称的四聚体形式存在,其中的一个二次轴与p2<,1>2<,1>2<,1>空间群的晶体学二次轴相一致,四聚体中的每个单体本质上是相同的,这也解释了晶体在中分辩率仍有较强的赝1222对称的原因。不同来源尤其是链霉菌来源的木糖异构酶的晶体结构相似,α/β桶的α2螺旋在不同的晶体结构中发生较大的位移,SDXyI的C-末端的357-264片段的构象与其它木糖异构酶有少量差异。SDXyI的活性中心存在两个钴离子而不是镁离子;SDXyI在钴离子和镁离子同时存在时优先结合钴离子。SDXyI的晶体结构测定结果倾向于支持从其它木糖异构酶中得出的负氢离子转移的催化机理。
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