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乙酰胆碱受体（Acetylcholine receptor,AChR）是一种配体介导的离子通道蛋白,由2α,β,γ（ε）δ共5个亚基组成。其中成熟的α亚基是自身免疫病重症肌无力（Myasthenia Gravis,MG）的主要免疫原,重症肌无力患者由于自身免疫系统的紊乱,体内产生了非正常的乙酰胆碱受体抗体,该抗体可与乙酰胆碱受体的α67-76,α125-147,α183-200氨基酸残基结合,减少功能性乙酰胆碱受体数量,抑制乙酰胆碱受体与乙酰胆碱结合,阻碍骨骼肌间神经传导。因此,长期以来,科学家们一直以AChR α-亚基N-端主要功能区片段为研究对象,从不同角度探讨MG的发病机理及其治疗的可能手段。本论文在前期工作的基础,着重进行了以下几个方面的研究。 AChRα205读框被克隆到含不同启动子的表达载体中（如pUC118,pET32M,pMAL-c2等）中,并在E. coli BL21中进行表达,其中目的蛋白只有在重组菌E. coli BL21/pMAL-AChRα205中获得了可溶性表达产物MBP-AChRα205,表达量可达到细胞总蛋白的30%,这也是国内外第一次获得AChR α亚基主要功能区的可溶性表达。经Amylose亲和纯化获得了融合蛋白MBP-AChRα205,而且经Factor Xa拆除可获得单一的AChRα205。同时,偶联在Amylose的MBP-AChRα205可作为一种免疫吸附剂。对小鼠抗AChR血清的免疫吸附实验表明,大约75%-98%的AChRAb可以被特异性清除,而血清蛋白、IgG、IgM、IgA仍能维持在正常水平。2例MG病人血清经该免疫吸附剂吸附后,AChRAb的清除率可达90%以上,清除效率要比那些化学合成的免疫吸附剂高的多。ELISA验证在免疫吸附过程中,没有MBP-AChRα205或AChRα205的脱落。 同时,我们也将目的基因片段延伸到AChRα211,并克隆到酵母表达载体pVT、pGAPZαA、pPIC9K中,转入酿酒酵母和毕赤酵母中进行分泌型表达。实验结果表明,重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K- AChRα211可以分泌表达有功能活性的目的蛋白,表达量可达到25mg/L。经阴离子交换层析和凝胶过滤层析,可获得电泳纯目的蛋白,并制备成免疫吸附剂,对两例肌无力患者血清中的AChRAb清除率可分别达到84%和94%。