家蚕杆状病毒晚期表达因子LEF-10的功能研究

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杆状病毒晚期基因表达因子(lateexpressionfactors,LEFs)是一类调控病毒晚期基因表达的蛋白因子,编码这些蛋白因子的基因统称为lef基因。有些lef基因是病毒DNA复制的必需基因或促进基因,有些是在转录水平行使调控功能的基因。所有的lef基因都能调控晚期基因的表达,是晚期基因表达的必需因子。在杆状病毒基因组上敲除目的基因被公认为是研究病毒基因功能的精确、有效的手段,特别是研究目的基因在整个感染周期中对病毒DNA复制和基因转录的调控作用。家蚕杆状病毒(BmNPV)中的LEF-10与其他晚期表达因子不具有显著的同源性,一般被认为是一种在转录过程中的辅助因子,但有关其在病毒复制繁殖中的作用机制还不清楚。在本研究中,我们通过Red重组系统敲除了BmNPV的lef-10基因,构建lef-10缺失型Bacmid,再将lef-10启动子和lef-10基因利用Bac-to-Bac系统重新补回到病毒基因组中。将构建的缺失型病毒DNA转染BmN细胞,经检测病毒滴度为零,而补回型重组病毒恢复到与野生病毒相似的感染水平,表明lef-10为BmNPV复制装配的必需基因。为了进一步了解LEF-10的作用机制,我们研究了lef-10缺失型Bacmid转染细胞后病毒基因组的复制情况以及病毒早期、晚期和极晚期基因的转录和表达情况。结果表明lef-10缺失后,病毒基因组的复制水平始终保持在较低水平;病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录水平均明显低于野生型和补回型重组病毒;早期蛋白LEF-3的表达水平也明显低于野生型和补回型重组病毒。以上研究结果表明:BmNPV lef-10为病毒复制必需基因,它对于病毒各个时期的基因转录以及早期基因的表达均具有重要影响。
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