【摘 要】
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为了研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis,俗名河蟹)的免疫机制,探索提高其防御能力,提供在生产实践中有效地防治河蟹疾病的科学依据,本研究用微量凝集试验、正交试验设计、(SDS-)聚丙
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为了研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis,俗名河蟹)的免疫机制,探索提高其防御能力,提供在生产实践中有效地防治河蟹疾病的科学依据,本研究用微量凝集试验、正交试验设计、(SDS-)聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫酶斑点技术等方法研究了河蟹血清凝集素的生物学特性。 微量凝集反应的结果表明,河蟹血清凝集素与部分动物红细胞(鼠、鸡、兔、鸽、人A、B、O型)和某些细菌(嗜水气单胞菌J-1株、八叠球菌)能发生不同程度的凝集作用,并且与鼠红细胞和与八叠球菌的凝集效价明显高于与其他动物的红细胞或细菌的凝集效价(P<0.01);与鲫鱼、鳖的红细胞以及大肠杆菌、短小杆菌、金黄色葡萄球菌、拟态弧菌H-7株、假单胞菌1.2株等细菌不发生凝集。来源于不同河蟹个体的血清凝集素对同种动物红细胞或细菌的凝集效价表现出较大的变化范围;不同性别河蟹的血清凝集素具有相同的凝集谱并且在凝集活性方面没有显著差异(P>0.05)。 在与鼠红细胞的凝集反应中,河蟹血清凝集活性不受0.01mol/L CaCl2和0.3mol/L NaCl的影响,但是可被0.6mol/L NaCl降低;在0.1~0.4mol/LEDTA(pH5.0)条件下,其血凝活性被完全抑制。 本研究还设计了河蟹体重、水温、细菌浓度等三因素三水平的正交试验,研究三种因素对河蟹血清凝集素产生的影响作用。结果表明,水温和体重不是重要的影响因素(P>0.05);注射不同浓度的细菌能够显著影响凝集素的产生(P<0.05),在注射细菌1~2天后凝集价可达到峰值,随后下降,在12~14天接近对照水平。此外,用细菌3次注射河蟹(间隔5~7天/次)可以刺激血清凝集素的凝集价的升高,但是增长效果不明显(P>0.05)。 首次用鼠红细胞膜作为介质吸附河蟹血清中的凝集活性分子,经解脱、复性,提取了凝集分子,建立了以鼠红细胞膜吸附、提取凝集素的方法。提取的凝集素经过SDS-PAGE可获得3条蛋白带,其分子量分别为120 100、117 300、114 600。 用吸附提取的凝集素免疫小鼠,分离鼠抗血清,以凝集素的血凝抑制试验和免疫酶斑点法通过检测该血清中抗凝集素的抗体效价,检验凝集素的免疫原性,结果表明,河蟹血清凝集素具有较好的免疫原性。
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