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[目的]研究强心苷类药物哇巴因对于人Burkitt’s淋巴瘤细胞株Raji细胞抑制增殖、诱导凋亡和自噬的作用及其作用机制。[方法]以不同浓度(25nM、50nM、100nM)哇巴因作用于Raji细胞,采用CCK-8法检测哇巴因对Raji细胞和正常人骨髓单个核细胞(BM-MNCs)的增殖抑制作用;应用光镜和AnnexinV-FITC/PI双染法观察Raji细胞形态,检测细胞凋亡率,Western Blot法检测cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平的变化;通过透射电镜(TEM)、单丹磺酰戊二胺(MDC)染色法检测Raji细胞自噬,Western Blot法检测Beclin-1、LC3和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白表达水平的变化。[结果]1.哇巴因呈浓度依赖性地抑制Raji细胞增殖。25 nM、50 nM、100nM哇巴因对Raji细胞的增殖抑制率分别为23.23±2.20%、32.20±4.09%和58.86±5.78%,各浓度组的抑制率具有显著性差异(P<0.05)。哇巴因作用于Raji细胞48h的IC50值为76.48nM。而同等浓度哇巴因对人BM-NNCs的增殖抑制率分别为5.44±0.91%、7.86±1.26%和17.31±1.55%,与Raji细胞相比,抑制率均有显著性差异(P<0.05)。2.哇巴因可诱导Raji细胞凋亡。光镜下可观察到Raji细胞出现胞浆空泡化、细胞膜皱缩、染色质增粗、浓集和边聚等凋亡形态学改变;25 nM、50 nM、100 nM浓度的哇巴因作用Raji细胞48h后,Raji细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率总体随着哇巴因作用浓度的升高而增高,仅100nM哇巴因组早期凋亡率低于50 nM哇巴因组;除25 nM哇巴因组Raji细胞早期凋亡率与对照组无明显差异外(P>0.05),其余各实验组早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。随着哇巴因作用浓度的升高,cleaved-caspase-3蛋白的表达明显增强,Bax/Bcl-2比值增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.哇巴因可诱导Raji细胞自噬。TTEM下可观察到Raji细胞胞浆中出现许多双层膜结构,包裹胞浆成分和线粒体等细胞器,形成自噬体、自噬溶酶体等典型的自噬形态学改变;MDC染色法可观察到,以25nM、50nM、100nM哇巴因作用于Raji细胞,荧光染色的细胞数量随作用浓度增加而逐渐增加,且细胞核周区域出现了较强的点块状荧光颗粒。随着哇巴因作用浓度的升高,Beclin-1表达明显增强,LC3-II/LC3-I比值增加,与对照组相比,差异具有统计学意义CP<0.05);PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及其下游底物S6K1和4EBP1蛋白磷酸化水平呈下降趋势,其中50nM和100nM哇巴因组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.100 nM以下哇巴因对Raji细胞具有明显增殖抑制作用,而对人BM-MNCs无明显毒性。2.哇巴因对Raji细胞有诱导凋亡的作用,该过程伴随着caspase-3活化和Bax/Bcl-2比值上调。3.哇巴因对Raji细胞有诱导自噬的作用,哇巴因可能通过负调控PBK/AKT/mTOR通路诱导Raji细胞发生自噬性死亡。