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目的:由于对缺血性卒中后脑损伤机制的认识不足,目前对脑缺血再灌注的治疗还不够充分。NLRP3炎症小体是先天免疫系统的重要组成部分,参与缺血性脑损伤,然而对其具体分子机制的了解尚不明确。本研究旨在探讨核因子E2相关因子-2(Nrf 2)对NLRP 3炎症小体的作用。方法:1.为探讨Nrf2是否参与调节氧糖剥夺再复氧(OGDR)后细胞损伤,拟体外培养BV2小胶质细胞,进行OGDR处理后,Western Blot检测OGDR 1、2、4、8、16、24h后Nrf2蛋白的表达,选择Nrf2蛋白表达水平最高的时间作为后续研究的时间点。2.为探讨Nrf2是否参与对BV2细胞OGDR后NLRP3炎症小体的调节,拟使用叔丁基对苯二酚(tBHQ,一种Nrf2特异性激动剂)或Nrf2 CRISPR敲减质粒对BV2细胞进行预处理,随后给予OGDR刺激。BV2细胞随机分组:正常对照组、OGDR组、OGDR+tBHQ组、OGDR+DMSO溶剂组、OGDR+CRISPR质粒组、OGDR+空载质粒组。Western Blot检测Nrf2、NQO1、NLRP3炎症小体相关蛋白以及IL-1β的表达;细胞免疫荧光观察Nrf2核内转移情况;活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS在细胞内的水平。3.为探讨ROS是否参与Nrf2/ARE通路对NLRP3炎症小体的抑制作用,拟使用乙酰半胱氨酸(NAC,一种ROS抑制剂)对BV2细胞进行预处理,随后给予OGDR刺激。BV2细胞随机分4组:正常组、OGDR组、OGDR+NAC组、OGDR+PBS溶剂组。用ROS检测试剂盒检测细胞内ROS水平;Western Blot检测Nrf2、NQO1、NLRP3炎症小体相关蛋白以及IL-1β的表达。结果:1.与正常组相比,OGDR 1、2、4、8、16、24h组BV2细胞Nrf2蛋白表达升高,并于8 h达最高值,因此选用OGDR 8 h作为后续研究的时间点。2.tBHQ预处理后Nrf2和NQO1蛋白表达均明显增加,NLRP3炎症小体相关蛋白和IL-1β表达明显降低;CRISPR质粒预处理后Nrf2和NQO1蛋白表达明显降低,NLRP3炎症小体相关蛋白和IL-1β表达明显增加。3.OGDR刺激后,Nrf2核内转移增多,且tBHQ预处理可以增强入核趋势,而CRISPR质粒则抑制入核趋势;同时,OGDR刺激后,ROS的生成会显著增加,而Nrf2可以抑制ROS的产生。4.NAC预处理可以显著减少OGDR诱导的ROS生成,进而降低NLRP3炎症小体相关蛋白及IL-1β的表达。结论:1.在OGDR诱导的BV2小胶质细胞中,Nrf2可以抑制NLRP3炎症小体的活化、减少ROS的产生。2.Nrf2/ARE信号通过抑制ROS从而对NLRP3炎症小体发挥负性调控作用。