子宫颈癌是全世界妇女中最常见的恶性肿瘤之一，而五年生存率仍只有在52％左右。近年来随着人乳头状瘤病毒，感染率的升高，子宫颈癌的发病率呈明显上升趋势，而且高发年龄趋于年轻化，成为严重危害女性健康的疾病。发达国家，如美国，每年约有1万宫颈癌新发病例。中国每年约有13.5万宫颈癌新发病例，死亡率占中国女性癌症的第2位。子宫颈癌是一种恶性度极高的肿瘤，治疗面临严重的挑战。手术仅对早期有治愈机会，放化疗易产生耐药及复发并发症发生的机会，目前晚期子宫颈癌的治疗仍面临巨大挑战，同时子宫颈癌前病变的逆转也需要一种新的思路。化疗药物如顺铂，因其不可避免的毒副作用限制了其使用剂量，同时也使部分患者不能耐受，这就迫切需要广大医学工作者寻找一些毒副作用小的药物来代替或协同目前的化疗药物达到较好治疗目的。　　β-谷甾醇(β-sitosterol)为高等植物中普遍存在的一种甾醇。在小麦芽油、玉米油、裸麦芽油、棉子油、水稻胚芽、金鸡纳茎皮和金鸡纳树蜡中存在，中药黄柏、人参、附子，半夏等亦含本品。临床有抗炎、抗癌活性。有报道掌叶半夏治疗子宫颈癌247例，初步证实了它的有效性、低毒性和安全性翻。但对该药的药理机制未进行过深入的研究。AWAD Atif B等人研究了β-sitosterol，对人类乳腺癌细胞的凋亡作用。本课题首次应用β-sitosterol观察其对体外培养的宫颈癌细胞株的作用并研究可能的作用机制，希望为临床HPV感染以及宫颈癌癌前病变的辅助治疗寻求一种新的途径，预防宫颈癌的发生，为晚期子宫颈癌提供治疗新思路。　　全文共分两个部分:　　1、β-sitosterol对宫颈癌细胞SiHa和HeLa的增殖抑制作用，促凋亡作用研究;　　2、β-sitosterol对宫颈癌细胞株S iHa和HeLa HPVE6及P53表达的影响。　　第一部分β-谷甾醇对宫颈癌细胞增殖和凋亡作用的研究　　目的：　　探讨β-谷甾醇对SiHa和HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其机制。　　方法：　　分别用1、5、10、15及20μ mol/Lβ-谷甾醇处理SiHa和HeLa细胞1、3、5天后，MTT法检测细胞增殖的变化，光镜观察细胞形态，流式细胞仪检测β-谷甾醇作用不同时间后SiHa和HeLa的细胞凋亡和细胞周期的变化;用免疫荧光实验检测β-谷甾醇作用24小时后细胞Bcl-2表达的变化。　　结果:　　β-谷甾醇对SiHa和HeLa细胞的增殖有抑制作用，并呈时间剂量依赖性;流式细胞仪检测结果表明，20μ mol/L的β-谷甾醇作用3天后SiHa和HeLa近50％细胞已经凋亡，作用5天后两种细胞的凋亡率高达70％以上，与对照组比较差异非常显著;而β-谷甾醇作用后两种细胞的细胞周期与对照组比较无明显区别。免疫荧光实验检测结果显示，20μ mol/L的β-谷甾醇作用24小时后，部分细胞呈现典型的凋亡形态学改变，SiHa和HeLa细胞Bcl-2的表达均明显下降。　　结论：　　β-谷甾醇能抑制SiHa和HeLa细胞增殖并诱导其凋亡，Bcl-2的表达下调可能参与凋亡过程。　　第二部分β-谷甾醇对宫颈癌细胞形态学和HPV E6及P53表达的影响　　目的：　　探讨β-谷甾醇对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa的形态学改变和HPV E6、P53mRNA及蛋白表达的影响。　　方法：　　采用倒置相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察SiHa和HeLa细胞经20μ mol/Lβ-谷甾醇作用后，细胞形态学和超微结构的变化。采用常规RT-PCR及Real time RT-PCR检测β-谷甾醇作用24小时后宫颈癌细胞株SiHa和HPV E6及P53 mRNA的表达变化;采用Western blot检测β-谷甾醇作用24小时后宫颈癌细胞株SiHa和HeLa HPV E6及P53蛋白的表达变化。　　结果：　　倒置相差显微镜下观察到β-谷甾醇作用后细胞出现皱缩并呈悬浮状态生长，进一步用扫描电镜和透射电镜观察发现β-谷甾醇作用后细胞表面的微绒毛明显减少，核固缩、胞浆空泡增多，出现凋亡表现。常规RT-PCR及Real time RT-PCR结果表明β-谷甾醇作用于SiHa和HeLa细胞24小时后，P53 mRNA表达水平明显增加，而HPV E6 mRNA表达水平明显下降，与对照组比较差异非常显著。Westernblot结果显示药物作用24小时后，两种细胞HPVE6蛋白的表达水平下降，与对照组比较差异显著，P53蛋白表达水平增加，但与对照组比较差异无统计学意义。　　结论：　　β-谷甾醇能明显抑制宫颈癌细胞株SiHa和HeLa HPV E6 mRNA和蛋白的表达;同时β-谷甾醇可以提高两种细胞P53 mRNA和蛋白的表达。这可能是β-谷甾醇抗宫颈癌的主要作用机制。