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柿是柿科(Ebenaceae)柿属(Diospyros Linn. )植物,我国是柿属植物的分布中心和原产中心之一,捌有丰富的种质资源。但长期以来,对我国柿属植物的种类和分布还缺乏清楚的了解,对我国柿属植物的起源、演化和亲缘关系缺乏深入的探讨。本研究首次开发了柿属植物SSR分子标记技术,并同时采用SSR,SRAP,IRAP和REMAP四种DNA分子标记技术,分别对供试7种柿属植物(柿Diospyros kaki Thunb. ;君迁子D. Lotus L. ;浙江柿D. glaucifolia Metc. ;油柿D. oleifera Cheng. ;金枣柿;老鸦柿D. rhombifolia Herosl. ;美洲柿D. virginian L. ;)进行了亲缘关系分析,以期从DNA水平上明确柿种间及种下的亲缘关系和分类地位,为柿属植物种质资源的科学利用提供依据。主要结果如下: 1.利用数据库查询的方法开发柿属植物SSR引物。查询GenBank,EMBL和DDBJ数据库中的柿属植物核酸序列,采用Sputnik筛选包含SSR的序列,用Primer Primere 5.0设计SSR引物。从98条核酸序列中共计筛选到SSR引物7对,并建立起柿属植物SSR-PCR扩增技术体系。 2.利用ISSR技术结合抑制PCR技术开发SSR引物。使用ISSR引物8条,对基因组DNA扩增后,设计抑制PCR引物进行染色体步行,共计开发出12对SSR引物,其中9对表现较好。在GenBank上登录序列19条。 3.采用链亲和素(streptavidin)与生物素(biotin)之间具有很强的亲和能力的原理,用链亲和素磁珠富集法使用生物素标记的探针(GA)10开发柿SSR引物6对,并在GenBank上登录6条。 4.利用自主开发的SSR标记,选用18对SSR引物对柿属植物的亲缘关系进行分析,实验中采用两种电泳方式进行检测。有关等位基因的相关信息从PAGE胶上获得,聚类图构建的数据则来源于琼脂糖凝胶电泳。结果通过琼脂糖凝胶电泳检测方式共得到158条多态性带,每个引物检测的带数从5到20条不等。6%的变性聚丙烯酰胺凝胶上检测到的等位位点数的变化从3到24不等,平均每个引物检测到15个位点。PAGE胶上所检测的扩增条带数明显比琼脂糖凝胶上的多。根据琼脂糖凝胶所获得的数据由NTSYS计算30份试材间的相似系数,结果表明供试材料的相似系数变化范围在0.42(浙江柿和老鸦柿)到0.93(富有和松本早生)间,平均值0.79。日本柿,中国柿和近缘种间相似系数平均值分别为0.83,0.81和0.71。期望杂合度和表观杂合度变化范围分别为0.42-0.77和0.27-0.59。 5.利用SRAP标记,使用文献中运用较多的7条正向引物,8条反向引物,通