目的牙髓组织受到炎症损伤后,修复性牙本质形成过程常伴有低氧。低氧促进人牙髓细胞（dental pulp cells,DPCs）成牙本质分化,并上调内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）水平。但是ERS在低氧促进DPCs成牙本质分化中的作用并不明确。本实验我们将研究ERS关键信号分子蛋白激酶R样内质网激酶[protein kinase（PKR）-like ER kinase,PERK]及下游信号通路在低氧促进DPCs成牙本质分化中的作用。旨在探讨低氧通过ERS促进修复性牙本质形成的机理,完善牙髓细胞分化理论,并为临床探索活髓保存治疗方法提供理论支持。方法1.低氧处理DPCs后,Western Blot检测ERS表达水平,茜素红染色检测DPCs矿化能力。2.以慢病毒作为载体,构建干扰慢病毒LV-PERK-RNAi,下调DPCs的ERS水平。3.采用Real-time PCR,Western Blot,碱性磷酸酶染色,茜素红染色等方法,体外观察低氧作用PERK基因干扰前/后DPCs成牙本质分化能力的变化。4.采用DPCs复合支架材料植入裸鼠背部皮下,结合HE染色和免疫组化染色,体内观察低氧预处理PERK基因干扰前/后DPCs在体内形成牙本质样组织的情况。5.通过染色质免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation,Ch IP）技术,检测低氧下DPCs内转录因子4（activating transcription factor4,ATF4）与成牙本质相关分子:骨钙素（Osteocalcin,OCN）、骨涎蛋白（Bone Sialoprotein,BSP）和牙本质涎磷蛋白（DentinSialophosphoprotein,DSPP）基因之间的结合关系。结果1.5%O2处理DPCs 2周,可促进其成牙本质能力。同时检测到PERK,真核生物转录起始因子e IF2α（eukaryotic translation initiation factor 2α,el F2α）及其磷酸化蛋白表达水平显著增高。2.PERK干扰慢病毒（LV-PERK-RNAi）构建成功,在m RNA水平的干扰效率为63%,并成功抑制了DPCs的PERK蛋白表达。3.5%O2处理DPCs 2周可以在体外促进其成牙本质分化;干扰PERK基因后,低氧成牙本质分化的促进作用将被减弱。4.体内实验结果显示:5%O2预处理DPCs 2周后,可在体内形成更多的牙本质样组织;干扰PERK基因后,DPCs几乎不能形成牙本质样组织。5.Ch IP结果显示5%O2处理DPCs 2周,ATF4与OCN、BSP、DSPP的启动子上游序列结合增加。结论低氧促进DPCs成牙本质分化,干扰PERK基因后该促进作用被削弱;同时,ATF4在转录水平促进成牙本质分化相关基因的表达。明确了内质网应激PERK-e IF2α-ATF4信号通路在低氧促进DPCs成牙本质分化过程中的重要作用。