【摘 要】
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目的肺癌是最常见的恶性肿瘤。肿瘤相关微环境中CD4+Foxp3+调节性T细胞增加在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。本研究探索拟非小细胞肺癌的发展过程中H37Rv感染所起的作用。方法体外实验中,我们对H37Rv按照不同的浓度梯度刺激巨噬细胞以探索最佳刺激浓度,并将最佳刺激浓度的H37Rv与巨噬细胞共培养4,对照组用未成熟的巨噬细胞与幼稚CD4+T细胞共培养4天,采用抗CD3特异性抗体包被磁珠提纯T细胞群,
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目的肺癌是最常见的恶性肿瘤。肿瘤相关微环境中CD4+Foxp3+调节性T细胞增加在肿瘤免疫逃逸中起重要作用。本研究探索拟非小细胞肺癌的发展过程中H37Rv感染所起的作用。方法体外实验中,我们对H37Rv按照不同的浓度梯度刺激巨噬细胞以探索最佳刺激浓度,并将最佳刺激浓度的H37Rv与巨噬细胞共培养4,对照组用未成熟的巨噬细胞与幼稚CD4+T细胞共培养4天,采用抗CD3特异性抗体包被磁珠提纯T细胞群,然后运用流式细胞术、CFSE染色等分析CD4+T细胞的增殖情况;通过荧光定量qRTPCR和免疫印迹法检测免疫相关分子的表达。体内实验中,我们通过皮下注射小鼠LLC细胞到小鼠建立成瘤模型,同时将热灭活H37Rv杆菌通过腹腔感染肿瘤细胞接种过的小鼠,将PBS腹腔注射作为对照组,通过测定肿瘤大小、体积等评估H37Rv感染对肺癌大小的影响;通过荧光定量qRT-PCR和免疫印迹法检测免疫相关分子的表达。结果1.H37Rv感染的巨噬细胞促进Treg细胞分化。流式细胞仪分析显示:当与H37Rv感染的巨噬细胞共培养时,Treg细胞比例显著升高,如CD4+Foxp3+细胞比例显著增加2倍以上。2.H37Rv促进巨噬细胞活化和PD-L1表达。受到H37Rv刺激后,巨噬细胞被激活,表面的活化标志物如MHCII和CD80表达增加。与蛋白水平类似,CD74和CD86mRNA水平在H37Rv感染组表达上调。细胞表面表达的PD-L1蛋白显著增加且呈时间依赖性。3.在小鼠模型中,H37Rv感染促进肿瘤生长。与非感染组相比,H37Rv感染组的肿瘤体积显著增加。与非感染组相比,H37Rv感染组的肿瘤数目和重量明显地增加。H37Rv感染提升了Treg比例,而其它T细胞类型比例无显著变化。结论本研究表明,H37Rv感染通过增强巨噬细胞PD-L1的表达促进Treg细胞的分化进而促进肺癌免疫逃逸。结核杆菌H37Rv感染促进小鼠模型中NSCLC的进展。
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目的:探讨3D打印的PLLA支架进行骨膜牵张成骨的可行性,联合自体BMSCs,研究不同孔隙的牵张装置对骨膜牵张成骨效果的影响,为临床修复大块骨缺损提供实验依据。方法:全骨髓贴壁培养法获取新西兰大耳白兔BMSCs,在体外扩增培养并进行成骨、成脂和成软骨多向诱导分化鉴定。根据填充率的不同,利用3D打印技术设计并打印三种不同孔隙的PLLA牵张支架。通过扫描电镜、CCK8法以及力学测试仪器等检测支架的结构
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