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目的:通过检测慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者应用恩替卡韦抗病毒治疗前后外周血中调节性T细胞Treg(CD4+ CD25high)细胞、辅助性T细胞17型Th17(CD4+ IL17+)细胞频数及相关细胞因子TGF-β、IL-17、IL-6等的变化,探讨恩替卡韦对慢乙肝患者Treg细胞与Th17细胞的影响。 方法: 1研究对象 收集2013年1月至2013年9月在沧州市中心医院及沧州市传染病医院就诊的慢性乙型肝炎患者41例,其中恩替卡韦(ETV)治疗组26例,非抗病毒治疗组15例,诊断标准按照《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》。入选标准:HBsAg阳性大于6个月,病毒载量≥1×104IU/ml,而且6个月内未应用其他药物抗病毒及免疫调节治疗。另设健康对照组15例。 2治疗方案 恩替卡韦治疗组,每天服用恩替卡韦0.5mg(雷易得恩替卡韦分散片,苏州东瑞制药有限公司生产),1次/天,连续24周;非抗病毒治疗组,每天服用护肝片等一般保肝药物。 3疗效考核 完全应答组:HBeAg、 HBV DNA均转阴,丙氨酸氨基转移酶恢复正常者;不完全应答组:病毒载量转阴或下降2 logIU/ml以上,不伴有HBeAg阴转,丙氨酸氨基转移酶恢复正常或下降;无应答组:未达到以上指标者。 4标本采集 分别采集治疗前、治疗后24周患者外周静脉血,其中3ml EDTA抗凝用于检测Treg细胞和Th17细胞;5ml促凝血离心后分离血清,用于生化、乙肝血清学标志物、病毒载量以及细胞因子TGF-β,IL-17,IL-6检测。 5检测方法 应用流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血中Treg细胞和Th17细胞频数;应用双抗体夹心ELISA法检测慢性乙型肝炎患者血清中TGF-β、IL-17、IL-6等细胞因子浓度;应用荧光定量PCR方法检测慢性乙型肝炎患者HBV DNA载量;采用全自动生化分析仪检测肝功能指标。 结果: 1健康对照组和慢乙肝患者外周血Treg细胞频数分别为1.98±1.06和5.72±2.54; Th17细胞频数分别为1.32±0.86和2.33±1.73; Treg细胞/Th17细胞的比值分别为1.50±1.02和2.45±1.26,慢性乙肝患者组显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。 2抗病毒治疗24周后,恩替卡韦治疗组Treg细胞频数、Treg细胞/Th17细胞的比值和细胞因子TGF-β、IL-6的水平均明显下降(P<0.05),Th17细胞频数和细胞因子IL-17的水平略有上升,但无统计学意义;非抗病毒治疗组Treg细胞频数、Th17细胞频数和Treg细胞/Th17细胞的比值及细胞因子TGF-β、IL-6和IL-17的水平均无明显变化。 3与治疗前相比较,完全应答组Treg细胞频数、Treg细胞Th17细胞的比值和细胞因子TGF-β、IL-6的水平明显下降(P<0.05),Th17细胞频数和细胞因子IL-17的水平明显上升(P<0.05);不完全应答组Treg细胞频数、Treg细胞/Th17细胞的比值和细胞因子TGF-3、IL-6的水平略有下降,Th17细胞频数和细胞因子IL-17的水平略有上升,无统计学意义;无应答组各项指标均无明显变化。 结论: 1慢性乙型肝炎患者外周血Treg细胞和Th17细胞频数以及Treg细胞/Th17细胞的比值均明显高于健康对照组,表明Treg细胞和Th17细胞在慢性乙肝的发生、发展过程中起到重要作用。 2慢性乙肝患者应用恩替卡韦进行抗病毒治疗可使患者外周血Treg细胞频数降低、Th17细胞频数升高,同时细胞因子TGF-β、IL-6水平降低、IL-17水平升高。 3慢性乙肝患者应用恩替卡韦进行抗病毒治疗可显著降低Treg细胞/Th17细胞的比值,从而达到抑制病毒复制、改善患者肝损伤程度的治疗效果。