【摘 要】
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长非编码RNA（long noncoding RNA,LncRNA）是一种核苷酸长度大于200bp并且不编码蛋白质的RNA。基于本实验室RNA-seq的结果,对lncRNA-2222497和醛酮还原酶家族1成员C1（aldo-keto reductase family 1 member C1,AKR1C1）进行了研究。主要研究结果如下:1.利用实时定量PCR技术,对lncRNA-2222497和A
【基金项目】
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“973”项目（2014CB138500）； 华中农业大学自主科技创新基金（2662015PY014,2662015PY108）； 湖北省自然科学基金（2015CFA101）； 湖北省农业科技创新课题；
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长非编码RNA（long noncoding RNA,LncRNA）是一种核苷酸长度大于200bp并且不编码蛋白质的RNA。基于本实验室RNA-seq的结果,对lncRNA-2222497和醛酮还原酶家族1成员C1（aldo-keto reductase family 1 member C1,AKR1C1）进行了研究。主要研究结果如下:1.利用实时定量PCR技术,对lncRNA-2222497和AKR1C1在不同妊娠天数的大白母猪和梅山母猪子宫内膜组织中的表达进行定量分析以及组织表达谱分析,结果表明上述基因表达趋势与测序结果基本一致。LncRNA-2222497在子宫内膜中高表达,且在大白母猪和梅山母猪妊娠32天极显著上升表达。AKR1C1在大白母猪妊娠32天表达量极显著升高;在梅山母猪妊娠9到15天表达量逐渐升高,在18天显著下降,而在32天又显著升高;AKR1C1在妊娠18天、32天的大白母猪中的表达量均比同时期梅山母猪高。利用Western Blot技术对AKR1C1在妊娠18天、32天的大白母猪和梅山母猪子宫内膜中表达进行进一步分析,结果表明AKR1C1在大白母猪和梅山母猪子宫内膜中表达变化趋势与RNA-seq相似。2.超表达lncRNA-2222497后发现其对AKR1C1基因有着上调表达的影响;抑制表达lncRNA-2222497会降低AKR1C1的表达。同时lncRNA-2222497在超表达后会抑制miRNA-378基因表达。抑制表达lncRNA-2222497会促进miRNA-378基因表达3.超表达miRNA-378后,AKR1C1的表达受到抑制;同时构建AKR1C1的3’UTR的双荧光野生和突变载体,通过双荧光检测发现miR-378可以与AKR1C1的3’UTR结合从而调控AKR1C1的表达。4.分别用0 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L浓度的孕酮处理子宫内膜细胞,100nmol/L组中lncRNA-2222497和AKR1C1的表达量显著升高。分别用0 nmol/L、10nmol/L、100 nmol/L浓度的雌激素处理子宫内膜细胞,100 nmol/L组中AKR1C1的表达量显著升高。综上所述,本研究发现lncRNA-2222497和AKR1C1在大白母猪及梅山母猪妊娠18、32天差异表达。以PK15细胞为主要材料,发现lncRNA-2222497、AKR1C1和miRNA-378三者之间可能存在联系,为进一步挖掘lncRNA-2222497、AKR1C1和miRNA-378在妊娠中的作用奠定基础。
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