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本文旨在利用载体pGEX-5X-3在大肠杆菌中原核表达多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2全长编码序列,纯化复性后对其活性进行检测,用PCR技术从克隆载体pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pGEX-5X-3,转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代半乳糖(IPTG)诱导获得相应表达产物——谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合蛋白,用Western印迹验证,表达产物复性后用谷胱甘肽-琼脂糖(Glutathione-Sepharose)4B亲和层析柱进行纯化。建立酶促反应体系,利用高效液相色谱(HPLC)进行酶活检测。
本研究中ppGalNAc-T2全长编码序列被成功表达和纯化,且具有一定催化活性,为进一步制备其多克隆抗体和蛋白质结晶打下了坚实基础。