幼年骨髓间充质干细胞修复同种异体老年兔软骨缺损的实验研究

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目的:比较幼年和老年兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外生长,增殖以及代谢活性等情况;将幼年来源的BMSCs复合载体构建组织工程软骨,异体移植修复老年兔关节软骨缺损,观察异体移植的可行性,并与老年兔自体BMSCs移植修复相比较,分析两者的效果。方法:分别取幼年和老年新西兰大白兔的骨髓组织,应用全骨髓培养+差速贴壁分离法获取BMSCs,经稳定传代至第5代后,采用细胞计数法描记细胞生长曲线,MTT法比较两者增殖代活性。待一定数量后,以胶原蛋白为载体,构建幼年BMSCs-胶原蛋白复合物,植入老年兔膝关节软骨缺损处,对照组为自体BMSCs-胶原蛋白,分别于术后6周,12周后处死,通过大体观察,HE染色,甲苯胺蓝染色,Ⅱ型胶原免疫组化,Wakitani组织学评分等,分析比较两者的修复效果。结果:幼年和老年BMSCs两者在体外培养时形态上无明显差别,均表现为多核细胞为主,胞体呈多角形或长梭形,呈纤维形态,但两者的生长以及增殖代谢活性有明显的统计学差异(P<0.05),幼年来源的BMSCs的体外生长,增殖代谢曲线上到达平台期的时间(约5-6天)早于老年兔,且到达平台期后的饱和密度也高于老年兔。幼年来源BMSCs异体移植修复老年兔关节软骨缺损,效果明显,12周时已与周围正常软骨相似,未见明显免疫排斥反应。Wakitani组织学评分结果,与单纯载体对照组相比,有显著的统计学差异(P<0.05),但与自体BMSCs移植修复相比,无统计学差异(P>0.05)。结论:幼年来源的BMSCs相对于老年BMSCs有以下特点:1)更易于提取,成功率更高;2)体外生长,增殖代谢活性均大于后者。BMSCs异体移植修复关节软骨缺损是可行的。幼年BMSCs体内成软骨能力并不像在体外那样,和老年BMSCs相比有显著差别,其具体机理有待进一步研究。
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