阪崎克罗诺杆菌鼠源单抗制备及抗体特性分析

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阪崎克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)属于肠杆菌科,具备该种属菌的基本形态和特征。该菌是一种重要的食源性致病菌,广泛存在于环境中,可以引起婴幼儿及免疫力低下的人群感染,发病率不高,但死亡率很高。该菌的常规检测方法耗时长、成本高,且缺乏常规的免疫学检测方法。为此,本研究以阪崎克罗诺杆菌为免疫原,制备了单克隆抗体。本研究以阪崎克罗诺杆菌甲醛灭活菌为免疫原,制备鼠源单克隆抗体,并对抗体特性分析。经5次免疫后血清效价达16 000以上的小鼠,采集其脾细胞与鼠源骨髓瘤细胞融合。利用间接ELISA筛选阳性瘤细胞株,经4次亚克隆后将稳定产生抗体的细胞株命名,分别为9D10、2H2。将2种细胞株腹腔注射至BALB/C小鼠体内制备2株单克隆抗体腹水。利用间接ELISA测定2株单克隆抗体腹水效价,9D10和2H2抗体效价分别为2×10~6、6×10~6。2H2抗体与9D10抗体有良好的特异性,与单核细胞增生性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、副溶血弧菌SH112、蜡样芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、大肠杆菌O157:H7、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌、苏黎世克罗诺杆菌、丙二酸克罗诺杆菌、莫氏克罗诺杆菌、广泛克罗诺杆菌、都柏林克罗诺杆菌均无交叉。亚型鉴定表明,9D10抗体轻链为kappa,重链为Ig G2a;2H2抗体轻链为kappa,重链为Ig G2a。通过辣根过氧化物酶标记抗体,利用竞争ELISA法观察2株抗体抗原决定簇有无竞争,结果表明,9D10抗体与2H2抗体抗原决定簇不同。综上所述,本试验成功制备出2株特异性强、效价高的抗阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体,并对抗体的特性分析,可为其快速检测方法的建立提供基础。
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