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P450超家族成员CYP17和CYP19分别是调控动物雄激素和雌激素合成的关键限速酶,在调控卵泡类固醇激素含量,维持卵泡生长发育过程中有重要作用。CYP17和CYP19在哺乳动物卵泡发育中的功能已被广泛研究,但禽类卵泡发育与哺乳动物存在较大差异,CYP17和CYP19在禽类卵泡发育过程中的表达调控机制及功能有待进一步研究。为此,本实验以处于产蛋高峰期的天府肉鹅母系母鹅卵泡为研究对象,克隆鹅CYP17和CYP19基因序列并检测其在卵泡膜层和颗粒层中表达模式,并初步探究CYP19核心启动子的活性调控区域。主要研究结果如下:(1)首次获得鹅CYP17和CYP19全长cDNA序列,全长分别为1521bp和1512bp。鹅CYP17和CYP19基因与鸟类的同源性都大于90%,构建进化树发现二者都先与原鸡聚在一起,表明鹅CYP17和CYP19基因与鸟类的同源性和进化关系远高于其他物种,符合生物间的亲缘关系。(2)在等级前和等级卵泡中,CYP17和CYP19在颗粒层中mRNA表达量都显著低于膜层(P<0.05);免疫组化结果显示,在等级前和等级卵泡中,CYP17蛋白主要表达于内膜,CYP19蛋白主要表达于外膜,二者在颗粒层中基本不表达,表明鹅CYP17主要在内膜层中发挥作用,CYP19主要在外膜层发挥作用。(3)CYP17在F4~F2阶段卵泡膜层中的mRNA表达量高于等级前卵泡(P>0.05),显著高于F1卵泡(P<0.05),表明CYP17在2mm卵泡~F2卵泡和F1卵泡中具有不同的作用;CYP19在F6~F1阶段卵泡膜层中的表达量高于等级前卵泡(P>0.05),并且显著高于2~4mm、4~6mm阶段的卵泡(P<0.05),表明CYP19在等级阶段卵泡和等级前卵泡中作用不同。(4)利用分段扩增成功获得鹅CYP19 5’端侧翼1924bp,并成功构建缺失载体p4.10-CYP19M1~p4.10-CYP19M6,在CHO细胞系中比较不同启动子载体活性发现,p4.10-CYP19M1双荧光素酶活性显著高于其他启动子载体(P<0.05),表明鹅CYP19启动子上游-118bp~Obp为核心启动子区,其他启动子载体活性随着载体长度增加而减少,表明-1924bp~-119bp为负调控区域。(5)卵泡膜层中荧光定量结果显示,转录因子AR、GATA4、GATA6与CYP19聚在一类,SREBP、C/EBP与CYP19未聚在一起,表明AR、GATA4、GATA6可能参与调控CYP19在卵泡膜层中的转录,而转录因子SREBP、C/EBP不参与。以上研究发现,CYP17和CYP19在卵泡发育过程中有不同作用,CYP19的活性调控区域为启动子上游-118bp~Obp,该区域内转录因子AR、GATA4、GATA6参与调控CYP19的转录调控。