论文部分内容阅读
目的:Rho家族(RhoA、RhoB、RhoC)属于小G蛋白家族,是一组相对分子量约20-25kD的GTP结合蛋白,在细胞的信号转导通路中发挥重要作用,并影响肿瘤的发生和发展。RhoB是Rho亚家族中一个较为独特的分子,虽然与同家族的RhoA、RhoC具有高度的同源性,但在不同组织和细胞中其表达定位和功能等方面存在明显不同,目前研究显示RhoB在肿瘤的发生发展中发挥抑癌基因作用。肾癌是我国泌尿系统最常见的肿瘤之一,占全身恶性肿瘤的2%-3%,主要起源于肾小管上皮细胞,其中60%-80%为肾透明细胞癌(ccRCC)。对于局限性肾透明细胞癌,手术切除是主要的治疗方法,对传统的放化疗不敏感,于是我们希望通过研究RhoB在肾透明细胞癌中的表达及对肾透明细胞癌的生物学功能研究,探索新的肿瘤治疗途径。方法:(1)通过蛋白免疫印迹(western blot)方法检测16例肾透明细胞癌及其对应的癌旁组织和3株肾癌细胞株(786-O,769-P,Caki-1)及其正常肾小管上皮细胞株(HKC)中RhoB的蛋白表达水平,并进一步通过免疫组化SP法检测80例肾透明细胞癌石蜡标本及10对肾透明细胞癌和对应癌旁正常组织石蜡标本中RhoB的表达,并结合病人临床病理特征进行统计学分析。(2)构建pcDNA3.0-Flag-RhoB真核表达载体,并通过脂质体转染法将其转入肾癌细胞786-O和Caki-1中,用MTS法、细胞平板克隆试验和流式细胞仪检测过表达RhoB对肾癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡效应的影响。结果:(1)RhoB在ccRCC组织和肾癌细胞株中表达水平明显低于相应的癌旁组织及正常肾小管上皮细胞株(HKC)(P值均<0.001),免疫组化结果显示RhoB的低表达水平与患者的肿瘤大小(P<0.001)、TNM分级(P=0.006)存在显著相关性,与患者年龄、性别无相关性(P>0.05)。(2)过表达RhoB显著抑制肾癌细胞786-O和Caki-1的细胞增殖,诱导细胞周期G2/M阻滞,促进细胞凋亡。结论:RhoB在肾透明细胞癌组织中和肾癌细胞系中低表达,且与肾透明细胞癌的恶性进展负相关。过表达RhoB显著抑制肾癌细胞的生长速度,诱导细胞周期G2/M阻滞,增强细胞的凋亡效应。RhoB在肾透明细胞癌的恶性进展中发挥抑癌基因的作用,可能为肾癌的分子靶向治疗提供新的思路。