间日疟康复者淋巴细胞活性分析

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目的:分析间日疟康复者淋巴细胞活性,为进一步揭示宿主浆细胞产生间日疟原虫红外期特异抗体能力,筛选红内期疫苗候选抗原提供研究基础。方法:在云南省疟疾流行区西盟县,对当地疾控中心于2009年内确诊为间日疟、于采样前无疟疾复发史且疟原虫镜检阴性的9例康复者进行静脉采血,肝素抗凝。8名健康者新鲜肝素抗凝静脉血来自云南普洱市思茅区,2009年无疟疾感染史,采样前镜检疟原虫阴性。密度梯度离心法分离17例入选者淋巴细胞,加入PHA-M用20ml培养瓶在37℃温箱中培养。培养24,48,68,70,72h后分别振荡培养瓶,将培养液中细胞重新悬起,移入10ml离心管中,1000rpm/min室温离心10分钟。尽量弃去上清,将沉淀物悬浮,取一滴放在载玻片上,推成血膜细胞(头,体,尾分明),甲醇干燥后,吉氏染液染色,30min后用超纯水轻轻冲洗2遍,晾干后在油镜下计数。结果:本次研究共对9例间日疟康复者、8例健康志愿者淋巴细胞活性进行检测,采17个入选对象新鲜肝素抗凝静脉血345ml,获淋巴细胞74.4×107个,107支淋巴细胞冻存悬液(1ml/支)。其中,间日疟康复者血205 ml,淋巴细胞40.2×107个,冻存悬液59支。9名间日疟康复者、8名健康者的淋巴细胞分别做24、48、58、68、70和72h转化实验,间日疟康复者淋巴细胞于刺激培养48h后开始出现转化,随后转化细胞的比例逐渐增多,于72h时的转化率达最高为51.78%;健康人淋巴细胞于刺激培养68h后转化细胞的比例明显增多,于72h时转化率达最高为70.37%。间日疟康复者、健康者淋巴细胞转化率于刺激培养58h前无统计学差异(P>0.05),68h后健康人淋巴细胞转化率明显高于间日疟康复者(P<0.05),过渡型淋巴细胞在两者间无显著差异。结论:健康人淋巴细胞转化率在PHA刺激68h后高于间日疟康复者,提示间日疟康复者的淋巴细胞对PHA的敏感性弱于健康人。
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