盐单胞菌合成PHAs条件优化及材料学性质研究

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聚羟基脂肪酸醋(Polyhydroxyalkanoates,PHA)通常作为碳源和能量储存在微生物中,因其具有与传统的石油基塑料相似的性质,又能够在自然环境下良好降解,被誉为环境友好型材料。PHA类化合物因生物相容性优良而广泛应用于医疗领域;因构成单体的不同而具有压电性、导电性,在材料领域被广泛应用;因具有生物降解性,在农业生产中以包埋杀虫剂被应用。随着对PHA研究的深入,提高PHA的合成量,降低生产成本成为PHA研究领域的热点。当以嗜盐菌作为出发菌株,可以发挥纯菌发酵所带来的高产特性,又利用嗜盐菌对高盐碱环境的耐受力可减少繁琐的灭菌环节,进而开发开放培养的低成本平台。本研究以实验室保存的嗜盐菌为基础,选取一株PHA合成量最大达41%的菌株,对其进行鉴定及发酵条件优化,采用FT-IR、DSC、XRD及降解性实验对菌株合成的PHA材料性质进行分析。Halomonassp.Z-1经苏丹黑和异染颗粒染色观察,生理生化反应分析,其革兰氏染色阴性,丙二酸盐实验阳性、西蒙氏枸橼酸盐实验阳性,不能还原硝酸盐,不能产生H2S,不能液化明胶;又经16S rDNA序列分析,鉴定为盐单胞菌(Gallomonas sp.),并将其命名为Z-1,获得登录号为MH428215。初步研究了营养和培养条件对Halomona.s sp.Z-1发酵合成PHA的影响以及生长规律。其中,Z-1可以利用葡萄糖,蔗糖,乳糖,麦芽糖,甘露糖,可溶性淀粉等多种碳源合成PHA类化合物;对氯霉素和利福平敏感,对链霉素,庆大霉素,氨苄青霉素和卡那霉素有抗性。通过发酵实验发现,Halomonas sp.Z-1的高产PHA条件为温度37℃,pH9.0,160r/min,500mL 三角瓶装液量90mL,培养至521h,PHA合成量最大达 56%。采用红外光谱技术,将PHB标样和Hallomonns sp.Z-1合成的聚合物共同分析,结果显示其二者图谱相近,均在1726、2980、2934、2876 cm-1处出现了 PHB的特征性吸收峰,菌株Z-1利用葡萄糖、壬酸、癸酸分别作为碳源合成的产物为PHB。通过分析差示扫描量热法的温度上升曲线可知,以葡萄糖作为碳源,产物的Tm值为61.40℃;以己酸作为碳源,Tm,值为62.3C℃;以壬酸作为碳源,Tml值为53.40℃;以癸酸作为碳源,Tm,值为70.40℃;以十一酸作为碳源,Tm值为77.40℃;即底物的选择影n响产物的组成和性质。葡萄糖,丁酸,戊酸分别作为碳源合成的PHA类化合物,在两个月内,减重率都在66%左右,说明在自然条件下Halomonas sp.Z-1的PHA类产物有极好的降解性。综上,Halomonas sp.Z-1作为PHA类化合物合成平台具有较高的优越性,为后续进一步研究其在开放条件下利用廉价底物奠定基础,同时,也为未来大规模生产应用提供必要理论依据。
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