本文以沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌O157、肠致病性大肠杆菌O111为研究对象,制备三株致病菌的能力验证(Proficiency Test,PT)样品,并对样品进行培养鉴定与检测,均匀性和稳定性测试,以制备均匀稳定、合格的微生物能力验证样品,评估实验室的检测能力。每个项目制备阳性与阴性能力验证PT样品,各组样品添加不同的目标菌和干扰菌制备混合菌PT样品。对标准菌株进行鉴定;将菌液进行稀释和菌落计数,探究干扰菌的选取、目标菌与干扰菌的添加浓度;采用冻干的绿豆粉为基质,真空冷冻干燥方式保藏样品;对研制的三组PT样品随机抽样分别进行平行检测以及均匀性、稳定性测试。经验证合格后向参与实验室发放样品进行定性检测。采用的干扰菌其菌落形态和生化性质与目标菌具有一定的相似性,每个样品最终添加约10~100 cfu/mL目标菌,添加104cfu/mL干扰菌;采用10%脱脂乳粉为冻干保护剂保藏样品;随机抽取的各组能力验证样品通过多次检测,其鉴定结果符合预期要求,抽检合格率为100%;均匀性和稳定性试验结果显示本研究制备的PT样品具有较好的一致性和稳定性。本试验建立了沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌O157、肠致病性大肠杆菌O111能力验证样品制备及效果评估的系统流程。经过样品的抽样平行检测和鉴定,样品的均匀性和稳定性评估验证,研制出合格的三种致病菌能力验证样品。