论文部分内容阅读
现在的养猪业规模巨大，相关动物产品的使用和食用人群众多，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-Resistantst Staphylococcus aureus，MRSA)的发现引发了各界对养猪业及其产品的普遍关注。到目前为止，由MRSA引起的人畜感染所占的比例呈逐年上升的趋势，并且常引起感染的爆发和流行、影响甚大。mecA基因是MRSA特有的耐药基因，femA功能基因是MRSA耐药性的辅助因子，两者在其耐药性中都起到了一定的作用。因此本试验采用mecA、femA基因检测，结果阳性则诊断为MRSA。本文旨在对从四川猪场采集120份样品中分离的猪源金黄色葡萄球菌进行PCR、扩增mecA和femA基因。对鉴定出的猪源MRSA进行耐药性检测与SCCmec分型。 本试验主要研究结果如下: 1.金黄色葡萄球菌的分离纯化:2013年3月至年2013年12月期间，在四川地区12个规模化猪场采集猪鼻腔拭子、粪便样品共计120份。采样后接种血清琼脂、37℃培养18h，在平板上挑取金黄、柠檬黄或灰白色、边缘整齐而且表面光滑的圆形菌落。革兰氏染色、镜检后，接种于卵黄甘露醇高盐琼脂培养基。在35℃、培养24到48h，在卵黄甘露醇高盐琼脂培养基上找出呈金黄色、周围有一圈淡黄色“油煎蛋”状晕环的单个菌落，分别接种于含有2％到4％NaCl溶液的3mLM-H肉汤中、在恒温培养振荡器中35℃纯化培养6-8h。共计分离得到了60株金黄色葡萄球菌。 2.MRSA的药敏试验:采用临床实验室标准化协会(Clinical and LaboratoryStandards Institute，CLSI)推荐的K-B纸片法和对MRSA进行药敏试验、以金黄色葡萄球菌ATCC25923为质控菌株，测定了分离所得的22株MRSA对4种β-内酰胺类药物和6种非β-内酰胺类药物的耐药性。药敏结果显示、此次分离所得的MRSA对β-内酰胺类药物的耐药率高、对非β-内酰胺类药物也表现出不同的耐药性，主要表现为4、5、6耐。此次分离得到的22株MRSA细菌对青霉素、头孢氨苄、头孢西丁、头孢哌酮的耐药率均为100％;对万古霉素、四环素均敏感;对环丙氟哌酸、红霉素、复方新诺明和磺胺异恶唑的耐药率分别为4.5％、4.5％、22.7％和18.2％。SCCmec基因分型结果表示，SCCmecⅣa型对非β-内酰胺类药物的耐药率均为0％，而SCCmecⅠ型的5株菌对非β-内酰胺类药物的耐药性相对较高。药敏试验的结果表明，此次分离所得的22株MRSA菌株的多重耐药性明显。 3.MRSA的PCR鉴定及SCCmec分型:应用mecA和femA基因的PCR检测、对60株金黄色葡萄球菌进行进一步的验证，将mecA和femA基因检测结果均为阳性者判定为MRSA。采用聚合酶链式反应(PCR)技术对分离的MRSA进行SCCmec基因分型。结果检测到22株MRSA，MRSA的检出率为18.3.％(22/120)。结果表明，四川地区猪源MRSA的主要流行类型为SCCmecⅣa型，其中SCCmecⅣa型17株、SCCmecⅠ型5株。22株MRSA中，5、6耐的5株MRSA都属于SCCmecⅠ型、4耐的MRSA菌株都属于SCCmecⅣa型。