前言 近年来，化学腐蚀伤的发生率逐年增加。所有化学性眼灼伤中以碱烧伤的损害最为严重。大量研究发现，基质金属蛋白酶(MMP)在碱烧伤后角膜溃疡的发生发展过程中可能具有重要作用。一直以来，人们都在试图寻找理想的内部和外部基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)来预防碱烧伤后的不良后果，目前为止已经取得了较大的进展，但碱烧伤什么时期MMP的分泌达到最高峰，MMP的含量与角膜溶解是否同步发生及什么时期应用TIMP效果最佳尚无明确的定论。本实验通过建立大鼠角膜碱烧伤模型来观察碱烧伤后不同时间角膜内MMP-1及其抑制剂的表达，明确二者在碱烧伤后角膜溶解过程中的作用，以求为临床合理地应用TIMP来防治角膜溃疡提供必要的理论依据。 实验材料 实验动物选择健康SD大鼠35只。主要试剂与器材有兔抗大鼠MMP-1多克隆抗体、山羊抗大鼠TMMP-1多克隆抗体、过氧化物酶标羊抗兔IgG、兔抗羊IgG及SP试剂盒，免疫组化计算机图像分析系统等。 实验方法 实验组建立大鼠角膜碱烧伤模型。于碱烧伤后按实验分组处死大鼠，迅速取材后进行HE及免疫组化染色，检测MMP-1及TIMP-1在碱烧伤后不同时期角膜内的表达和变化。同期采用荧光素钠染色，于裂隙灯下观察角膜形态学的变化。 结 果 正常大鼠角膜组织中无MMP4及其抑制剂的表达。实验鼠伤后第1天，角膜上皮缺失，基质纤维肿胀增粗，角膜缘出现炎细胞浸润；第4J天基质溃疡逐渐加深，大量炎细胞浸润，可出现基质层坏死、脱落；烧伤后第14天溃疡达高峰期，角膜溶解坏死加重，炎细胞浸润程度减轻；第ZI毛8天，溃疡逐步修复，可见基质纤维粘连。兔疫组化显示MMPl于伤后第1天开始升高，14天达到最高，此后呈现下降趋势，但仍高于正常对照。而TIMP＊早期有所表达，而后活性逐渐下降，伤后第14天降至最低水平，此后又再度上升，21天时达到最高。 讨 论 碱烧伤后角膜溃疡的形成极大程度上是蛋白水解酶作用的结果。在诸多蛋白水解酶中，最主要的为基质金属蛋白酶，简称MMPS。MMPS是近年来发现的结构与功能相关的含锌肽链内切酶家族，根据其结构和作用底物的不同，MMPS可分为一种，其中MMP一在碱烧伤后角膜溃疡的形成发展中可能具有重要的作用。组织型基质金属蛋白酶抑制物（TIMPS）是近年来发现的一组多功能因子家族，目前已发现4个成员。其中TIMP＊为MMP一的内源性抑制物，可与活化的MMP1以1：l的比例结合，特异性地抑制其活性，对于维持细胞外基质oCM）的稳态具有重要的作用。检测碱烧伤后角膜组织中MMPI及其抑制剂的表达有助于深入研究角膜碱烧伤的机理。 本实验通过免疫组化方法及病理图像分析系统对MMPl及TIMP上的有关研究表明，H者的表达在碱烧伤后不同时间内差异显著并与角膜溶解的临床病理过程具有同步性。通过对 ．2．TIMP1的研究可为尽早防治碱烧伤后角膜溃疡穿孔提供新的途径，在碱烧伤的治疗上具有潜在的价值。关于MMP＊与TIMP＊的激活和抑制的分子机制，以及为防治角膜溃疡穿孔如何合理地调节二者之间的平衡有待进一步研究。 结 论一、角膜溶解高峰期出现于碱烧伤后第14天。H、碱烧伤后第14天MMPl分泌达高峰，TIMP1分泌达最低点。三、角膜溶解的临床病理过程与MMPl及TIMPd分泌密切相关。