猪传染性胸膜肺炎(Porcine Contagious pleuropneumonia)是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的,属于猪三大呼吸道传染病之一,在世界绝大部分国家和地区均有爆发,给养猪业造成了巨大的经济损失。猪场一旦感染该病其急性致死率高达80%以上,而转变成慢性感染后会严重影响猪的生长,且存活下来的猪会成为病原携带者,在适当的条件下将能使该病再次爆发。因此,为了有效的防疫和控制该疾病的爆发,对该病的检测,特别是早期诊断具有重要的意义。目前,使用最为广泛的诊断手段是利用间接ELISA技术对APP感染猪血清中的抗体进行检测。虽然该方法具有易于操作、特异性好等优势,但是其灵敏度低、耗时长等不足严重制约了其在临床上的应用。所以,建立新型的快速、高灵敏度的检测方法具有现实意义。磁性微粒,简称磁珠自上世纪70年代以来得到了广泛的研究,因为其具有粒径小(10nm-100μm)、比表面积大、生物亲和性好以及超顺磁性和分散性好等特点而被作为一种有效的固相载体用在免疫诊断、生物分子纯化和细胞分离等生物领域中。用于免疫诊断中,因为磁珠捕获抗体(抗原)分子能力强,且在三维空间进行免疫反应,所以利用磁珠作为载体进行疾病的免疫检测具有灵敏度好、检测时间快、易于操作和检测成本低等特点使其具有巨大的应用价值而得到研究者的重视。本实验以磁珠为固相载体,以大肠杆菌原核重组表达的APP特异性的外毒素蛋白ApxIVA作为抗原,构建了一种简单、低成本且易于操作的基于磁珠-酶放大的荧光免疫方法检测APP感染血清中的ApxIVA抗体。其具体方法为:首先将ApxIVA抗原蛋白固定在磁珠表面,依次加入感染血清进行第一次免疫反应,加入酶标二抗进行第二次免疫反应。HRP可以催化底物对羟基苯乙酸产生具有荧光信号的联苯乙酸,而感染APP血清中的ApxIVA抗体就可以通过测定联苯乙酸的强度而进行检测；。在最优的实验条件下,我们得到了很好的线性,即在160-5120倍稀释的标准阳性范围内成线性。该办法的检测线是10240倍稀释血清,远远低于传统的ApxIVA-ELISA方法的检测线(320倍)(S/N=3)。同时,我们测定了11组320倍稀释的标准阳性血清,计算它们的相对标准偏差为4.8%。这说明我们提供的方法具有很好的重复性。同时,与商用¨ApxIVA-ELISA试剂盒共同分析了78份临床猪血清,其结果比较发现两种方法具有89.7%的符合率、90.9%的敏感性和89.3%的特异性。这说明我们构建的方法具有应用于临床诊断检测的潜能。