论文部分内容阅读
本文以刺五加(Eleutherococcus senticosus(Ruprecht&Maximowicz)Maximowicz)根茎为原料,采用天然表面活性剂茶皂素水溶液为提取溶剂-超声辅助法从刺五加根茎中提取刺五加苷B和E。应用响应面法对提取工艺进行了优化,并利用高速逆流色谱法对上述提取物中的刺五加苷B和E进行了分离纯化,主要内容如下:1.建立了刺五加苷B和E的高效液相检测方法,色谱条件为:流动相的比例:0.05%三氟乙酸:乙腈(88:12,v/v);流速1.0 mL/min;进样量10 μL;柱温25℃;刺五加苷B和E的检测波长分别是265 nm和210 nm;色谱柱Hypersil BDS-C18(4.6 mm × 250 mm,5μm);等度洗脱26min。刺五加苷B和E在所测范围内,具有良好的线性关系。2.确定了刺五加苷B和E的最佳提取方法,考察了表面活性剂的种类及浓度、液料比、超声功率及不同超声功率下的提取动力学、提取温度及不同温度下的提取动力学对刺五加苷B和E得率的影响。采用响应面法对提取条件进行了优化,确定了最佳的提取条件:0.3%茶皂素水溶液,液料比为20:1 mL/g,超声频率为45 kHz,超声时间为40 min,超声功率为250W,提取温度为50℃,在该条件下,刺五加苷B和E的提取得率分别为 1.18±0.05 mg/g 和 2.87±0.12 mg/g。3.利用高速逆流色谱法对茶皂素水溶液-超声辅助提取得到的粗提物中的刺五加苷B和E进行分离纯化的研究。通过对比不同比例的氯仿-甲醇-水、氯仿-甲醇-异丙醇-水体系的分配系数(K),筛选出氯仿-甲醇-异丙醇-水体系对刺五加苷B和E的分离效果最理想,确定了最佳的溶剂体系比例为:氯仿-甲醇-异丙醇-水(5:6:1:4,v/v/v/v),采用响应面法对高速逆流分离纯化的工艺条件进行了优化,考察了不同转速、温度、流速对保留率的影响,确定了最佳的工艺参数为:转速899r/min,流速1 mL/min,温度35℃,在该条件下,保留率(R)为54.1%。收集流出液,浓缩,经过两次重结晶,通过HPLC测定,刺五加苷B和E的纯度分别为94.7%、96.1%。以茶皂素水溶液为提取溶剂,超声辅助提取,用高速逆流色谱以对目标产物进行分离纯化,此方法简单容易操作。