赤芍中单萜苷的分离及转化和虫草素的体外代谢研究

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第一部分以赤芍总苷和单萜苷类成分为研究对象,对其进行提取分离,并对芍药苷进行生物转化研究。对赤芍总苷的提取工艺进行优化,确定最佳提取体系为:提取溶剂70%甲醇,提取时间1 h,料液比1:10,最终制备赤芍总苷70.79 g,经过测定得芍药苷含量为424 mg/1g总苷。再利用最佳条件得到赤芍提取液,然后分别用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等萃取,浓缩成提取浸膏,经薄层色谱、硅胶柱、反相制备柱等分离手段,最终得到了五种单萜苷类化合物,分别为芍药苷29.5 g,氧化芍药苷235 mg,苯甲酰芍药苷67 mg,苯甲酰氧化芍药苷43 mg,芍药内酯苷0.70 g,经HPLC检测,并利用面积归一法计算纯度均在95%以上。将制备的芍药苷进行β-葡萄糖苷酶转化,经脱葡萄糖的反应,最终得到芍药苷元。第二部分为虫草素体外肝微粒体代谢的研究,从大鼠肝脏中制备得到肝微粒体,采用Lowry法测定大鼠肝微粒体蛋白浓度,计算得浓度为25.88 mg/ml。以大鼠肝微粒体为代谢模型,并辅以各种辅酶对虫草素进行培养,最佳温孵体系为:肝微粒体酶2.0 mg/mL、NADP 1.0 mmol/L、NADH 0.5 mmol/L、G-6-P 10.0mmol/L、G-6-P DH 1.0 IU/mL、MgCl2 4.0 mmol/L、虫草素1.0 mg/10 mL。选择转化率最高的样品,对其进行液质检测,通过相关代谢软件和相关知识对数据进行分析共发现8个代谢产物,其中鉴定7个代谢产物的分子式。在已鉴定的7个分子式中,确定了4个代谢物的结构式和1个与谷氨酰胺结合的代谢产物,分别为4-羧酸咪唑葡萄糖醛酸结合物、3,4,5-三甲氧基氧代四氢呋喃-2-羧酸葡萄糖醛酸结合物、C6H5O2与谷氨酰胺结合物、呋喃-2-甲醇葡萄糖醛酸结合物、呋喃-2-甲醇葡萄糖醛酸结合物、氧化虫草素。
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